铁皮石斛均一化全长cDNA文库的构建与序列分析(2)
2.3cDNA 的均一化全长cDNA 均一化使用试剂盒TRIMMER-DIRECT cDNA Normalization Kit(evrogen， Cat#NK002)。将已纯化的双链cDNA混合后杂交，取8 μL双链cDNA (1 μg) 和8 μL hybridization buffer 混匀，平分成4份，置于0.2 mL PCR 管于98 ℃ 放置2 min，再迅速移入68 ℃ 水浴锅中杂交5 h。在杂交完成前准备DSN酶，将1 μL DSN storage buffer和1 μL DSN 酶混匀，标记为1/2×DSN；将3 μL DSN storage buffer 和1 μL DSN酶混匀，标记为1/4×DSN；直接取1 μL DSN storage buffer，标记为对照。依次加入下4 μL杂交后的cDNA，5 μL 2×DSN master buffer (68 ℃预热) ......
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