1.4.2cDNA第一链的SCoT PCR扩增PCR反应体系为10×buffer，2.0 μL；2.5 mmol·L^-1 MgCl₂，2.0 μL；0.1 mmol·L^-1 dNTP 0.2 μL；0.5 μmol·L^-1引物，1.0 μL；Taq DNA聚合酶，0.4 μL；第一链cDNA稀释产物3.0 μL；加水至20 μL。PCR反应程序为 94 ℃ 预变性5 min；94 ℃变性35 s，51 ℃退火35 s，72 ℃延伸1.5 min，共35个循环；72 ℃最后延伸10 min。PCR扩增产物在1.0% 的琼脂糖凝胶以120 V恒压电泳40 min。

    1.5差异片段的回收、克隆、测序与分析

    差异片段割胶用SanPrep柱式DNA胶回收试剂盒回收纯化，溶于适量ddH₂O，于-20 ℃保存备用。将回收的差异片段克隆到pGEM-T Easy vector载体上。连接产物转化大肠杆菌感受态细胞，在含有IPTG，X-gal，Amp抗性的培养基上37 ℃培养过夜，进行蓝白斑筛选，阳性克隆经菌液PCR检测后，于上海生工测序部测序。测序结果利用NCBI (http：//ncbi.nlm.nih.gov) 数据库的BLAST分析功能比对测序结果。

    2结果与分析

    2.1RNA提取和逆转录

    提取的总RNA经电泳检测，28S，18S，5S带型完整且清晰，说明RNA的质量较好。紫外吸收值A₂₆₀/A₂₈₀的比在2.0～2.1，说明所提取的总RNA纯度较高，也说明该方法可以有效去除蛋白、多糖、酚类等物质的干扰(图1) ......