寿胎丸对复发性流产小鼠蜕膜蛋白质组的影响(2)
2.3胚胎丢失判断标准及胚胎丢失率计算方法孕14 d断颈处死小鼠,胚胎丢失的判断标准参照尤昭玲等[6]的方法,即丢失之胚胎体积明显缩小,胎儿胎盘单位有明显出血或坏死。胚胎丢失率(embryo loss rate, ELR)的计算方法按下列公式进行:ELR=丢失胚胎数/(丢失胚胎数+存活胚胎数)×100%。2.4标本制备方法孕14 d断颈处死小鼠,妊娠子宫离体后,自子宫角处钝性撕开子宫壁,将胎儿胎盘单位从着床部位剥离,用小号组织剪刀分离着床部位的蜕膜组织,取5个着床部位,用预冷的PBS冲洗干净后,迅速置液氮中保存。
2.5总蛋白的提取与浓度测定将蜕膜组织从液氮中取出,预冷双蒸水快速充分洗涤,滤纸吸干液体。采用蛋白裂解液(按50 mg 标本用1 mL裂解缓冲液)提取蜕膜组织总蛋白。蛋白质浓度测定采用Amersham Biosciences公司专门针对蛋白质组学研究的蛋白质抽提设计的2D Quant Kit定量试剂盒。
2.6固相pH梯度双向凝胶电泳主要参照IPGphor等电聚焦系统使用指南进行。组织总蛋白上样量为800 μg ......
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