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编号:13169272
金鸡脚中影响糖代谢的新黄烷醇苷研究(2)
http://www.100md.com 2013年3月15日 《中国中药杂志》 2013年第6期
     2.3 偶联抗体比色法测定细胞膜上L6GLUT4myc 实验方法参考文献[6-7],在分化后的L6GLUT4myc培养板中加入不同浓度的化合物(留空白孔,背景孔和胰岛素孔),24 h后无血清培养3 h,加入100 nmol·L-1的胰岛素,20 min后立即将培养板置于冰上;用预冷的含1 mmol·L-1 Ca2+和1 mmol·L-1 Mg2+的PBS(+)溶液洗涤肌管3次,以下所有溶液都用含1 mmol·L-1 Ca2+和 1 mmol·L-1Mg2+的PBS(+)配制,用5%山羊血清封闭细胞,10 min后用抗myc单克隆抗体4 ℃孵育1 h;PBS(+)冲洗6次以洗去未与细胞结合的抗体,用4%多聚甲醛(PFA)冰上固定10 min(室温固定20 min) ......
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