醋制降低京大戟对人正常肝细胞LO2的毒性及机制研究(2)
2.3Hoechst 33258 荧光染色观察细胞凋亡 将灭菌的盖玻片置于6孔板内，取对数生长期的单细胞悬液，调整细胞密度为1×105个/mL，接种于6孔板中，每孔2 mL，设给药组和阴性对照组，置于37 ℃，5% CO2及饱和湿度条件下细胞培养箱中培养24 h后，给药组加入终浓度为600，400，200 mg·L-1京大戟生、醋品，每孔1 mL，阴性对照组加入等体积的无血清细胞培养液，每组设3个复孔，将培养板置入37 ℃，5% CO2培养箱中培养。48 h后吸弃培养液，加入0.5 mL固定液，4 ℃固定30 min。弃固定液，用PBS洗2遍，每次3 min，吸尽液体。加入0.5 mL Hoechet 33258染色液，在摇床上染色5 min。PBS洗2遍，每次3 min。滴1滴抗荧光淬灭封片液于载玻片上，盖上贴有细胞的盖玻片，使细胞接触封片液。用荧光显微镜在激发波长350 nm左右，发射波长460 nm左右检测并拍照 ......
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