牛膝多糖刺激的DC联合CIK细胞对SW480的杀伤作用研究(2)

http://www.100md.com 2013年4月1日 周智东 夏大静

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     2.3 DC的诱导和培养^[2] 取25 mL肝素抗凝人外周血用等量Hanks液稀释。用Ficoll分离液密度梯度离心分离、吸取富含外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells， PBMC)的白膜层；再用Hanks液洗涤，用Tris^.NH₄Cl破除残留的少量红细胞，离心、洗涤后用含10%胎牛血清(FCS)的RPMI1640培养液铺板培养，37 ℃，5%CO₂培养2 h，吸出未贴壁的单个核细胞用作CIK细胞的培养；贴壁的单个核细胞用DC完全培养液(含10%FCS的RPMI1640加入rhGM，CSF 50 μg·L^-1，rhIL，4 10 μg·L^-1)悬浮调整细胞浓度为5×10⁶个/mL，在6孔培养板中每孔2 mL，37 ℃，5%CO₂培养，每3 d换液1次，诱导培养DC。

    2.4 CIK细胞的诱导和培养^[3] 在前述含未贴壁细胞的RPMI1640培养液中加入rhIFN，γ 1 000 U·mL^-1，24 h后再添加抗CD3单抗50 μg·L^-1，rhIL，2 200 U·mL^-1。每3 d换液1次(含相同浓度的抗CD3单抗和rhIL，2)； 37 ℃，5%CO₂诱导培养CIK细胞 ......

    http://www.100md.com/html/paper/1001-5302/2013/07/26-1.htm

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