清心开窍方含药脑脊液对连二亚硫酸钠所致PC12细胞损伤的保护机制研究(2)
1.6 RTPCR检测方法 组织中总RNA的提取:取50 mg左右冻存组织标本至匀浆器中加l mL Triozl快速研磨。将匀浆液转移到无菌、RNassefree的1.5 mL离心管中,用吸头反复吹打,振荡后室温静置5 min。加人200 μL氯仿,振荡混匀15 s,室温静置3 min,4 ℃,12 000 r·min-1离心15 min。将上清小心转移到无菌、RNassefree的1.5 mL离心管中,加入等体积预冷的异丙醇(-20 ℃预冷),混匀,冰浴10 min。4 ℃,12 000 r·min-1离心15 min。弃上清,吸水纸控干液体,加人1 mL 75%冰乙醇(DEPC水配制),混匀。4 ℃,8 000 r·min-1离心5 min,弃上清,吸水纸控干。重复1次。控干后,斜放室温晾20 min,加人20~30 μL DEPC水,所得溶液即为RNA样品,可立即使用或置-80 ℃冰箱保存。RNA纯度鉴定:取5 μL RNA溶液 ......
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