2.6 Western blot检测TNFR1蛋白的表达 用含蛋白酶抑制剂的裂解液提取细胞蛋白，用BCA法测定组织液中蛋白含量，取50 μg蛋白上样，用10%SDSPolyacrylamid胶电泳后转至PVDF膜，10%脱脂奶粉的TBST封闭2 h，分别加入1∶200稀释的TNFR1及βactin的多克隆抗体常温下孵育5 h。PBST 洗膜后，与过氧化物酶标记二抗室温孵育2 h。应用试剂ECL显影于胶片。以测量得到的TNFR1/ βactin 蛋白的比值作为TNFR1蛋白的相对含量。

    2.7 统计学方法 计量资料用±s表示，采用SPSS 17.0统计软件进行方差分析，P<0.05为差异有统计学意义。

    3 结果

    3.1 细胞上清液LDH活性比较 Aβ2535干预后细胞上清液中LDH活性与对照组相比明显升高(P<0.05)；吲哚美辛及小檗碱干预则可以显著降低上清液中LDH活性(P<0.05)；其中吲哚美辛对LDH的改善作用较小檗碱更为明显(P<0.05)；而小檗碱高剂量组的改善作用优于低剂量组(P<0.05)，见表1。

    表1 小檗碱对Aβ2535诱导SHSY5Y细胞LDH活性、TNFα水平、TNFR1 mRNA及蛋白表达的影响(x±s ......