正交设计法优选银杏黄酮凝胶骨架片处方工艺(1)
[摘要]缓释片制剂以其特有的优点，已成为当前缓控释研究领域的热点之一。针对普通银杏制剂在治疗心脑血管疾病中存在的缺点，该文研制了银杏黄酮凝胶骨架片，并对制备该制剂所采用的骨架材料、黏合剂、填充剂的种类及用量进行了考察与评价，同时采用正交设计试验，优选出最佳处方。采用零级、一级、Higuchi及Ritger-pappas模型对药物总黄酮醇苷释放曲线进行拟合，进而探讨药物释药机制。
[关键词]银杏黄酮；骨架片；正交设计；总黄酮醇苷；释药机制
[稿件编号] 20121221008
[基金项目] 国家重点基础研究发展计划(973)项目(2012CB724001)；中药制药过程新技术国家重点实验室开放基金项目(SKL2010Z0301)
[通信作者] *杨星钢，副教授，硕士生导师，主要从事药物新剂型与中药现代化研究，Tel：(024)23986315，E-mail：yangxg123@163.com
, http://www.100md.com
[作者简介] 郭迎新，E-mail：guoyingxin2010@126.com
银杏叶是银杏的干燥叶，《本草纲目》载有“其性味甘苦而涩，入肺、肾二经，有定喘止咳、止带浊、缩小便”的功效[1]。银杏叶提取物主要含有银杏黄酮和萜类内酯两大活性成分，其中银杏黄酮主要包括槲皮素、异鼠李素、山柰素3种苷元与糖基结合形成的黄酮醇苷，萜类内酯主要由白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C组成。据报道黄酮类成分在抗氧化和心血管疾病方面疗效显著[2-3]。
普通银杏制剂存在给药次数频繁，血药浓度波动大，不方便患者长期服用的现象[4]。因此，有必要研制银杏叶凝胶骨架片，使药物在体内缓慢释放，以达到平稳血药浓度，减少不良反应，提高病人顺应性的目的。凝胶骨架片口服后遇消化液水化形成凝胶，药物通过扩散或(和)凝胶骨架溶蚀的方式释药。因其具有开发周期短、制备成本低、工艺简单、释药性能好等优点而日益受到重视[5]。本研究以银杏黄酮释放量为指标，在单因素考察基础上采用正交设计法筛选出最优处方，以2种羟丙甲基纤维素混合使用作为骨架材料，制备了日服1次的银杏黄酮凝胶骨架片。
, 百拇医药
1 材料
AR1140电子分析天平(奥豪斯国际贸易上海有限公司)；RCZ-6B药物溶出度仪(上海黄海药检仪器厂)；LC-10ATVP高效液相色谱仪(日本岛津公司)；SPD-10AVP检测器(日本岛津公司)；TDP单冲式压片机(上海第一制药机械厂)；硬度测定仪(上海海药检仪器厂)；101-2AB电热鼓风干燥箱(天津市泰斯特仪器有限公司)。
银杏叶提取物(银杏总黄酮醇苷含量28.7%，萜类内酯含量9.8%，江苏康缘药业股份有限公司)；槲皮素、异鼠李素、山柰素对照品均购自中国食品药品检定研究院，批号分别为100081-200907，110861-200808，110860-200406；羟丙甲基纤维素 (K4M，K15M，K100M)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)K30均由上海卡乐康公司提供；微晶纤维素PH101、乳糖均由德国JRS公司提供；预胶化淀粉(北京凤礼精求有限责任公司)；十二烷基硫酸钠(天津博迪化工股份有限公司)；硬脂酸镁(上海药用辅料厂)；甲醇为色谱纯；其他试剂均为分析纯。
, http://www.100md.com
2 方法
2.1 体外分析方法的建立
2.1.1 色谱条件[6] Diamonsil C18色谱柱(4.6 mm×200 nm，5 μm，迪马公司)；C18保护柱(4.6 mm×10 mm，天津金州科学仪器有限公司)；流动相甲醇-0.4%磷酸溶液(55∶45)，流速1.0 mL·min-1；柱温35 ℃；检测波长360 nm；进样量20 μL；理论塔板数按槲皮素峰计算应不低于2 500。在上述色谱条件下槲皮素、山柰素、异鼠李素混合对照品溶液和银杏叶样品溶液的色谱图见图1。
1.槲皮素；2.山柰素；3.异鼠李素。
图1 对照品溶液(A)和样品溶液(B)液相色谱图
, 百拇医药
Fig.1 HPLC chromatograms of standard(A) and sample solution(B)
2.1.2 标准曲线的绘制 分别称取槲皮素、山柰素、异鼠李素对照品3，3，2 mg，置10 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。分别精密吸取上述对照品溶液0.25，0.50，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。按2.1.1项下色谱条件进样分析并记录峰面积，由峰面积(A)对质量浓度(C)作线性回归，得槲皮素、山柰素、异鼠李素的回归方程分别为A=9 435.4C-18 839，r=0.999 9(n=7)，A=11 440C-13 072，r=0.999 8(n=7)，A=12 707C-9 816.1，r=0.999 7(n=7)。结果表明，槲皮素和山柰素在7.5～90 mg·L-1线性良好，异鼠李素在5～60 mg·L-1线性良好。
2.1.3含量测定 取制备好的凝胶骨架片20片，精密称定，研细，精密称取粉末适量(约相当于1片含药量)，加甲醇-25%盐酸(4∶1)混合溶液50 mL，超声溶解，置水浴中加热回流2 h后，迅速冷却至室温，转移至100 mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，0.45 μm微孔滤膜过滤，取续滤液进样分析，将各成分峰面积分别代入标准曲线，计算总黄酮醇苷含量。
2.1.4 精密度考察 精密吸取上述对照品溶液20 μL注入色谱仪，连续进样6次，记录色谱图，测定峰面积，经计算槲皮素、山柰素、异鼠李素峰面积的RSD分别为1.2%，0.7%，1.4% ，表明仪器精密度良好。, http://www.100md.com(郭迎新，李非，赵倩倩，徐璐，潘卫三，萧伟，杨星钢)
[关键词]银杏黄酮；骨架片；正交设计；总黄酮醇苷；释药机制
[稿件编号] 20121221008
[基金项目] 国家重点基础研究发展计划(973)项目(2012CB724001)；中药制药过程新技术国家重点实验室开放基金项目(SKL2010Z0301)
[通信作者] *杨星钢，副教授，硕士生导师，主要从事药物新剂型与中药现代化研究，Tel：(024)23986315，E-mail：yangxg123@163.com
, http://www.100md.com
[作者简介] 郭迎新，E-mail：guoyingxin2010@126.com
银杏叶是银杏的干燥叶，《本草纲目》载有“其性味甘苦而涩，入肺、肾二经，有定喘止咳、止带浊、缩小便”的功效[1]。银杏叶提取物主要含有银杏黄酮和萜类内酯两大活性成分，其中银杏黄酮主要包括槲皮素、异鼠李素、山柰素3种苷元与糖基结合形成的黄酮醇苷，萜类内酯主要由白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C组成。据报道黄酮类成分在抗氧化和心血管疾病方面疗效显著[2-3]。
普通银杏制剂存在给药次数频繁，血药浓度波动大，不方便患者长期服用的现象[4]。因此，有必要研制银杏叶凝胶骨架片，使药物在体内缓慢释放，以达到平稳血药浓度，减少不良反应，提高病人顺应性的目的。凝胶骨架片口服后遇消化液水化形成凝胶，药物通过扩散或(和)凝胶骨架溶蚀的方式释药。因其具有开发周期短、制备成本低、工艺简单、释药性能好等优点而日益受到重视[5]。本研究以银杏黄酮释放量为指标，在单因素考察基础上采用正交设计法筛选出最优处方，以2种羟丙甲基纤维素混合使用作为骨架材料，制备了日服1次的银杏黄酮凝胶骨架片。
, 百拇医药
1 材料
AR1140电子分析天平(奥豪斯国际贸易上海有限公司)；RCZ-6B药物溶出度仪(上海黄海药检仪器厂)；LC-10ATVP高效液相色谱仪(日本岛津公司)；SPD-10AVP检测器(日本岛津公司)；TDP单冲式压片机(上海第一制药机械厂)；硬度测定仪(上海海药检仪器厂)；101-2AB电热鼓风干燥箱(天津市泰斯特仪器有限公司)。
银杏叶提取物(银杏总黄酮醇苷含量28.7%，萜类内酯含量9.8%，江苏康缘药业股份有限公司)；槲皮素、异鼠李素、山柰素对照品均购自中国食品药品检定研究院，批号分别为100081-200907，110861-200808，110860-200406；羟丙甲基纤维素 (K4M，K15M，K100M)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)K30均由上海卡乐康公司提供；微晶纤维素PH101、乳糖均由德国JRS公司提供；预胶化淀粉(北京凤礼精求有限责任公司)；十二烷基硫酸钠(天津博迪化工股份有限公司)；硬脂酸镁(上海药用辅料厂)；甲醇为色谱纯；其他试剂均为分析纯。
, http://www.100md.com
2 方法
2.1 体外分析方法的建立
2.1.1 色谱条件[6] Diamonsil C18色谱柱(4.6 mm×200 nm，5 μm，迪马公司)；C18保护柱(4.6 mm×10 mm，天津金州科学仪器有限公司)；流动相甲醇-0.4%磷酸溶液(55∶45)，流速1.0 mL·min-1；柱温35 ℃；检测波长360 nm；进样量20 μL；理论塔板数按槲皮素峰计算应不低于2 500。在上述色谱条件下槲皮素、山柰素、异鼠李素混合对照品溶液和银杏叶样品溶液的色谱图见图1。
1.槲皮素；2.山柰素；3.异鼠李素。
图1 对照品溶液(A)和样品溶液(B)液相色谱图
, 百拇医药
Fig.1 HPLC chromatograms of standard(A) and sample solution(B)
2.1.2 标准曲线的绘制 分别称取槲皮素、山柰素、异鼠李素对照品3，3，2 mg，置10 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。分别精密吸取上述对照品溶液0.25，0.50，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。按2.1.1项下色谱条件进样分析并记录峰面积，由峰面积(A)对质量浓度(C)作线性回归，得槲皮素、山柰素、异鼠李素的回归方程分别为A=9 435.4C-18 839，r=0.999 9(n=7)，A=11 440C-13 072，r=0.999 8(n=7)，A=12 707C-9 816.1，r=0.999 7(n=7)。结果表明，槲皮素和山柰素在7.5～90 mg·L-1线性良好，异鼠李素在5～60 mg·L-1线性良好。
2.1.3含量测定 取制备好的凝胶骨架片20片，精密称定，研细，精密称取粉末适量(约相当于1片含药量)，加甲醇-25%盐酸(4∶1)混合溶液50 mL，超声溶解，置水浴中加热回流2 h后，迅速冷却至室温，转移至100 mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，0.45 μm微孔滤膜过滤，取续滤液进样分析，将各成分峰面积分别代入标准曲线，计算总黄酮醇苷含量。
2.1.4 精密度考察 精密吸取上述对照品溶液20 μL注入色谱仪，连续进样6次，记录色谱图，测定峰面积，经计算槲皮素、山柰素、异鼠李素峰面积的RSD分别为1.2%，0.7%，1.4% ，表明仪器精密度良好。, http://www.100md.com(郭迎新，李非，赵倩倩，徐璐，潘卫三，萧伟，杨星钢)