2.8 Real-time RT-PCR 分析 分别于药物干预12，24，36 h提取总RNA，Real-time RT-PCR法检测TRAP及CTSK破骨细胞特异性因子的表达水平。所用引物由Takara公司设计并合成(表1)，总RNA的提取采用Trizol一步法进行，紫外分光光度计检测纯度并计算浓度，调整总RNA的质量浓度为50 mg·L^-1，反转录体系、PCR扩增体系及反应条件均参照试剂盒说明书设定，经内参校正，以12 h的CON组数据归一处理，求得目的基因的相对表达量。

    2.9 统计学分析 实验数据均以±s表示，采用SPSS 19.0 统计软件进行单因素方差分析(One-Way ANOVA)，组间两两比较选用LSD法，P<0.05表示有显著性差异，P<0.01表示有极显著性差异。

    3 结果

    3.1 对TRAP 染色阳性细胞的影响 TRAP染色可见细胞胞浆内TRAP活性区域形成棕红色沉淀，TRAP染色阳性且细胞核在3个者即为破骨细胞(图2) ......