2.4 表达载体构建及其在大肠杆菌中的表达 参照Uchida等^[11]的报道，截短鲨烯合酶C端疏水区域，设计一对含BglⅡ与SalⅠ酶切位点的引物(表1)扩增鲨烯合酶基因ORF序列，构建重组质粒pET-30b(+)-PpSQS并转化大肠杆菌DH5α。经酶切和测序鉴定后，提取重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)。挑选单菌落接种于10 mL Kan抗性LB培养液，37 ℃摇床上振荡培养过夜；然后按照2%的接种量接种于50 mL Kan抗性的LB培养液，37 ℃振荡培养至对数生长期(A600 0.4～0.8)，加入IPTG至终浓度为1 mmol·L^-1，32 ℃诱导培养。收集诱导前、诱导2 h和诱导4 h菌液，经超声波裂解后，取上清进行SDS-PAGE电泳分析。

    3 结果与分析

    3.1 滇重楼鲨烯合酶基因PpSQS的克隆 滇重楼总RNA经电泳检测，结果显示28S，18S，5.8S清晰可见，28S-18S接近2∶1 ......