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编号:13154396
断肠草与金银花类药材水提液特异性PCR鉴定方法研究(2)
http://www.100md.com 2013年8月15日 《中国中药杂志》 2013年第16期
     2.3 模板DNA质量的检测 为了保证特异性PCR的扩增成功率,对不同样品的DNA进行了质量检测。取不同样品DNA,终浓度约为10 mg·L-1,使用通用引物psbA和trnH进行PCR反应以检测模板DNA质量。反应体系总体积为20 μL,包括10×buffer缓冲液2 μL, dNTP 1.6 μL,引物各0.5 μL, EX Taq 0.2 μL,DNA 0.5 μL,灭菌蒸馏水14.7 μL,约10 ng模版DNA。PCR反应液配制完后,轻轻震荡混匀,将PCR管放入PCR仪中,进行如下反应:解链温度95 ℃,时间5 min;退火温度57 ℃,时间30 s;复性温度72 ℃,时间为1 min 40 s;35个循环后72 ℃延伸7 min,获得扩增产物。取3 μL扩增产物,采用1%的琼脂糖凝胶,在电压100~150 V下电泳15 min,凝胶成像系统下观察并拍照。

    2.4 水煮时间、样品量、通用引物对水提山银花药材扩增的影响 根据上述提取DNA的方法 ......
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