基于位点特异性PCR的黄芪与红芪鉴别方法研究(2)
表2 引物及PCR反应条件
Table 2 Primer and PCR reaction conditions
2.2 总DNA的提取、PCR扩增条件的确定 分别取约100 mg干燥根作为材料,使用CTAB法提取总DNA。取不同样品DNA,终质量浓度大约为10 mg·L-1,使用通用引物 trn L和 trn F进行PCR反应以检测模板DNA质量。反应体系总体积为20 μL,包括10×buffer缓冲液2 μL, dNTP1.6 μL,引物各0.25 μL (5 pmol·L-1), EX Taq 酶0.2 μL (5 U·μL-1),DNA 0.5 μL,灭菌蒸馏水14.7 μL,约10 ng DNA。PCR反应液配制完后,轻轻震荡混匀,将PCR管放入PCR仪中,进行如下反应:预变性温度95 ℃,时间5 min,变性温度95 ℃,时间30 s,退火温度52 ℃ ......
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