2/STAT3信号通路的影响> 氧化苦参碱对感染性休克大鼠肾组织JAK2/STAT3信号通路(1)
[摘要] 目的：观察氧化苦参碱(oxymatrine，OMT)对感染性休克大鼠肾组织JAK2/STAT3信号通路的影响。方法：采用大鼠盲肠结扎穿孔法(cecal ligation and puncture，CLP)复制大鼠感染性休克模型，随机将56只SD大鼠分为假手术组、OMT对照组、模型组(CLP)、CLP + OMT高、中、低剂量组(52，26，13 mg·kg-1)、阳性对照组(CLP+地塞米松10 mg·kg-1)。光镜下观察大鼠肾组织病理学改变，采用尿酶法测定血清尿素氮(BUN)含量，RT-PCR法测定肾组织肿瘤坏死因子-α (TNF-α )，白细胞介素-1 β (IL-1 β ) mRNA的表达；Western blot测定肾组织JAK2，STAT3的表达；放射免疫分析法测定肾组织匀浆中TNF-α 及IL-1 β 蛋白含量的改变。结果：不同剂量的OMT能抑制肾组织JAK2，STAT3的活化( P <0.05)，减少JAK2，STAT3的蛋白表达( P <0.05)及TNF-α ，IL-1 β mRNA的表达( P <0.05)，降低肾组织匀浆中TNF-α 及IL-1 β 的含量( P <0.05)，降低血清BUN含量( P <0.05)，改善肾组织充血、水肿和炎性细胞浸润等病变，并且该作用在OMT高、中剂量组与阳性对照组的结果相一致。结论：OMT能通过抑制JAK2/STAT3信号通路的活化，减少肾组织TNF-α ，IL-1 β 等促炎因子的表达，进而对感染性休克大鼠肾损伤性病变发挥治疗作用。
, 百拇医药
[关键词] 氧化苦参碱；感染性休克；肾损伤；JAK2/STAT3
[收稿日期] 2013-02-24
[基金项目] 宁夏自然科学基金面上项目(NZ13068)；宁夏回族自治区卫生厅重点科研计划课题(2012004)；银川市科技攻关项目(2012年)；宁夏医科大学科学研究基金项目(XM2012013)
[通信作者] *张鸣号，副教授，硕士生导师，Tel：(0951)6980100，E-mail：zhangmh270@163.com
[作者简介] 王秀玉，学士，编辑，Tel：13995171299 感染性休克(septic shock)的早期往往出现急性肾损伤(acute renal injury，ARI)或急性肾功能衰竭(ARF)，死亡率很高，然而感染性休克时肾损伤发生的详细机制尚不清楚。研究发现，Janus激酶-信号转导转录激活因子(janus kinase-signal transduction and transcription activator，JAK/STAT)途径参与了脓毒症大鼠急性肺损伤的发生[1]，抑制JAK/STAT通路可能会减轻感染性休克大鼠重要脏器的功能损伤[2]。然而，JAK/STAT通路是否参也与了感染性休克大鼠急性肾损伤的发生，尚未见相关报道。本实验在盲肠节扎穿孔 (cecal ligation and puncture，CLP) 法复制大鼠感染性休克模型的基础上观察JAK2/STAT3信号通路活化在肾损伤中的作用及氧化苦参碱(OMT)注射液对其的影响。
, 百拇医药
1 材料
1.1 动物 清洁级，健康雄性SD大鼠，体重180～220 g，宁夏医科大学动物中心，合格证号SCXK(宁)2011-001。
1.2 药品、试剂 苦参素(氧化苦参碱)注射液(宁夏启元药业有限公司，批号090119)；地塞米松(湖北天药药业股份有限公司，批号20110624)；血清尿素氮检测试剂盒(南京建成生物工程研究所，批号20101123)，125Ⅰ肿瘤坏死因子-α 放射免疫分析试剂盒(批号20100807)，125Ⅰ白细胞介素-1 β 放射免疫分析试剂盒(批号20100808)(北京科美东雅生物技术有限公司)；大鼠JAK2及STAT3单克隆抗体(Santa Cruz公司)；RT-PCR 试剂盒(Promega公司，批号260685)；Western blot和IP细胞裂解液及BCA 蛋白浓度测定试剂盒(江苏碧云天生物技术有限公司)。
, http://www.100md.com
1.3 仪器 DMS200紫外-可见光分光光度计(Varian公司)；核酸浓度测定仪、PCR仪、SDS-PAGE电泳仪、转移电泳仪(Bio-Rad公司)；凝胶成像仪、DYY-Ⅲ电泳仪(北京六一仪器厂)；GC-1200 γ 放射免疫计数器(科大创新股份有限公司)；OLYMPUS CHC-212 型光学显微镜(日本)；1130/Biocut 超薄切片机(德国)。
2 方法
2.1 分组与给药 将SD大鼠随机分成7组，每组8只，分别为假手术(CON)组、OMT对照组、模型组(CLP)、CLP+OMT高、中、低剂量组(52，26，13 mg·kg-1)、阳性对照组(CLP+地塞米松10 mg·kg-1)。术前测量大鼠尾动脉压作为其基础血压。
2.2 模型制备及检测 参照文献采用CLP法复制大鼠感染性休克的动物模型后[3]，尾静脉注射药物，容量均为5 mL·kg-1。假手术组和OMT对照组于无菌条件下打开腹腔暴露并辨认盲肠，关腹后分别尾静脉注射NS和OMT 各26 mg·kg-1，CLP组给予等容量NS。术后监测鼠尾动脉压，以大鼠血压降到基础血压的2/3，脉压小于20 mmHg作为判断脓毒症状态即模型成功的标准(造模成功率53.3%)。, http://www.100md.com(王秀玉 张鸣号 杨美玲 姜怡邓 李桂忠 杨晓玲 徐华 曹军)
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[关键词] 氧化苦参碱；感染性休克；肾损伤；JAK2/STAT3
[收稿日期] 2013-02-24
[基金项目] 宁夏自然科学基金面上项目(NZ13068)；宁夏回族自治区卫生厅重点科研计划课题(2012004)；银川市科技攻关项目(2012年)；宁夏医科大学科学研究基金项目(XM2012013)
[通信作者] *张鸣号，副教授，硕士生导师，Tel：(0951)6980100，E-mail：zhangmh270@163.com
[作者简介] 王秀玉，学士，编辑，Tel：13995171299 感染性休克(septic shock)的早期往往出现急性肾损伤(acute renal injury，ARI)或急性肾功能衰竭(ARF)，死亡率很高，然而感染性休克时肾损伤发生的详细机制尚不清楚。研究发现，Janus激酶-信号转导转录激活因子(janus kinase-signal transduction and transcription activator，JAK/STAT)途径参与了脓毒症大鼠急性肺损伤的发生[1]，抑制JAK/STAT通路可能会减轻感染性休克大鼠重要脏器的功能损伤[2]。然而，JAK/STAT通路是否参也与了感染性休克大鼠急性肾损伤的发生，尚未见相关报道。本实验在盲肠节扎穿孔 (cecal ligation and puncture，CLP) 法复制大鼠感染性休克模型的基础上观察JAK2/STAT3信号通路活化在肾损伤中的作用及氧化苦参碱(OMT)注射液对其的影响。
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1 材料
1.1 动物 清洁级，健康雄性SD大鼠，体重180～220 g，宁夏医科大学动物中心，合格证号SCXK(宁)2011-001。
1.2 药品、试剂 苦参素(氧化苦参碱)注射液(宁夏启元药业有限公司，批号090119)；地塞米松(湖北天药药业股份有限公司，批号20110624)；血清尿素氮检测试剂盒(南京建成生物工程研究所，批号20101123)，125Ⅰ肿瘤坏死因子-α 放射免疫分析试剂盒(批号20100807)，125Ⅰ白细胞介素-1 β 放射免疫分析试剂盒(批号20100808)(北京科美东雅生物技术有限公司)；大鼠JAK2及STAT3单克隆抗体(Santa Cruz公司)；RT-PCR 试剂盒(Promega公司，批号260685)；Western blot和IP细胞裂解液及BCA 蛋白浓度测定试剂盒(江苏碧云天生物技术有限公司)。
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1.3 仪器 DMS200紫外-可见光分光光度计(Varian公司)；核酸浓度测定仪、PCR仪、SDS-PAGE电泳仪、转移电泳仪(Bio-Rad公司)；凝胶成像仪、DYY-Ⅲ电泳仪(北京六一仪器厂)；GC-1200 γ 放射免疫计数器(科大创新股份有限公司)；OLYMPUS CHC-212 型光学显微镜(日本)；1130/Biocut 超薄切片机(德国)。
2 方法
2.1 分组与给药 将SD大鼠随机分成7组，每组8只，分别为假手术(CON)组、OMT对照组、模型组(CLP)、CLP+OMT高、中、低剂量组(52，26，13 mg·kg-1)、阳性对照组(CLP+地塞米松10 mg·kg-1)。术前测量大鼠尾动脉压作为其基础血压。
2.2 模型制备及检测 参照文献采用CLP法复制大鼠感染性休克的动物模型后[3]，尾静脉注射药物，容量均为5 mL·kg-1。假手术组和OMT对照组于无菌条件下打开腹腔暴露并辨认盲肠，关腹后分别尾静脉注射NS和OMT 各26 mg·kg-1，CLP组给予等容量NS。术后监测鼠尾动脉压，以大鼠血压降到基础血压的2/3，脉压小于20 mmHg作为判断脓毒症状态即模型成功的标准(造模成功率53.3%)。, http://www.100md.com(王秀玉 张鸣号 杨美玲 姜怡邓 李桂忠 杨晓玲 徐华 曹军)