基于均匀设计法评价制川乌与川贝、浙贝反药配伍组合的镇痛和祛痰镇咳作用(1)
[摘要] 目的：研究制川乌与川贝、浙贝反药配伍组合不同配比和剂量变化对小鼠镇痛、祛痰、镇咳作用的影响。方法：采用均匀设计法，按2因素7水平以小鼠醋酸致扭体次数、气管酚红分泌量、咳嗽次数为指标，分别观察制川乌与川贝、制川乌与浙贝2种合煎液口服给药后对小鼠镇痛、祛痰、镇咳作用的影响，并选取有显著意义的配比和剂量进行验证。结果：对扭体次数的影响：合煎液能降低小鼠扭体次数；经回归分析可知，制川乌与川贝存在协同作用，且1∶1时协同作用最小，总剂量大于5 g·kg-1时，1∶1合煎液对扭体次数的降低作用最小。对气管酚红分泌量的影响：合煎液能增加小鼠气管酚红分泌量；经回归分析可知，制川乌与川贝存在拮抗作用，且1∶1时拮抗作用最大，当总剂量小于10 g·kg-1且川贝∶制川乌等于5∶1时，合煎液对气管酚红分泌量的升高作用接近最小。对咳嗽次数的影响：合煎液降低小鼠咳嗽次数；经回归分析可知，制川乌与川贝存在拮抗作用，且当1∶5[1-2]。有学者认为十八反组对能否同用与配伍比例及剂量等密切相关[3]。故此，本研究采用均匀设计的方法，以乌头与贝母的主要药理作用为观察指标，评价制川乌分别与川贝、浙贝不同剂量配比的合煎液口服后对小鼠镇痛、祛痰、镇咳作用的影响，以便为十八反反药组合作用的深入研究提供实验依据。
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1 材料
1.1 动物 ICR小鼠，雄性，体重18～22 g，来源于中国人民解放军军事医学科学院实验动物中心，动物许可证号SCXK(军)2007-004。
1.2 药材 制川乌产自四川江油，川贝产自四川，浙贝产自浙江，均购自北京华邈中药工程技术开发中心；经中国中医科学院中药研究所王孝涛研究员鉴定，分别为毛茛科植物乌头 Aconitum carmichaelii Debx.的干燥母根的加工炮制品、百合科植物川贝 Fritillaria cirrhosa D. Don和浙贝母 F.thunbergii Miq.的干燥鳞茎。
1.3 试剂 乙酸(冰醋酸，分析纯，国药集团化学试剂有限公司，批号10000292)；二甲苯(分析纯，北京化工厂，批号20091124)；氨水(分析纯，北京化工厂，批号20100502)；苯酚红(国药集团化学试剂有限公司，批号F20070402)；碳酸氢钠(分析纯，北京化工厂，批号20100716)。
, 百拇医药
1.4 仪器 HF-200电子天平(赛多利斯公司)；SHZ(Ⅲ)循环水式真空泵(河南省予华仪器有限公司)；YLS-Q4耳肿打孔器(济南盖延科技发展有限公司)；402A1型鱼跃牌超声雾化器(江苏鱼跃医疗设备股份有限公司)；MK3型全自动酶标仪(德国Thermo公司)。
2 方法
2.1 药品制备 制川乌与川贝或浙贝分别按均匀设计的不同剂量配比混合后加入圆底烧瓶中，加10倍量蒸馏水，浸泡1 h；电热套加热，第1煎1.5 h，过滤；第2煎加8倍量的蒸馏水，煎煮1.5 h，过滤；合并2次滤液。60 ℃旋蒸浓缩，浓缩到实验所需要体积，4 ℃备用。
2.2 分组与给药 将制川乌、川贝或浙贝分别作为考察因素，每个因素各设7个水平，按均匀设计U7(72)及其使用表进行安排，共得7种配比，具体见表1。以前期探索的制川乌镇痛抗炎作用的有效剂量、川贝或浙贝镇咳祛痰作用的有效剂量为依据，确定制川乌剂量范围为0.16～21.6 g·kg-1、川贝为0.03～15 g·kg-1、浙贝为0.2～15 g·kg-1。
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表1 2因素7水平均匀设计表U7(72)
Table 1 2 factors and 7 levels of uniform design table U7(72)
雄性ICR小鼠150只，体重(20±2) g，随机分为15组，每组10只，即模型组，配伍A，B，C，D，E，F，G，H，A′，B′，C′，D′，E′，F′，G′，H′组，各配伍组按表2或3设计的剂量灌胃给药，按10 g体重0.2 mL给药，同时模型给予生理盐水对照。
表2 制川乌与川贝配伍均匀设计剂量表
Table 2 The dose proportion of Aconiti Radix Cocta and Fritillaria cirrhosa based on uniform design, 百拇医药(谭淑芳 刘春芳 王春生 王丹华 张彦琼 林娜)
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1 材料
1.1 动物 ICR小鼠，雄性，体重18～22 g，来源于中国人民解放军军事医学科学院实验动物中心，动物许可证号SCXK(军)2007-004。
1.2 药材 制川乌产自四川江油，川贝产自四川，浙贝产自浙江，均购自北京华邈中药工程技术开发中心；经中国中医科学院中药研究所王孝涛研究员鉴定，分别为毛茛科植物乌头 Aconitum carmichaelii Debx.的干燥母根的加工炮制品、百合科植物川贝 Fritillaria cirrhosa D. Don和浙贝母 F.thunbergii Miq.的干燥鳞茎。
1.3 试剂 乙酸(冰醋酸，分析纯，国药集团化学试剂有限公司，批号10000292)；二甲苯(分析纯，北京化工厂，批号20091124)；氨水(分析纯，北京化工厂，批号20100502)；苯酚红(国药集团化学试剂有限公司，批号F20070402)；碳酸氢钠(分析纯，北京化工厂，批号20100716)。
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1.4 仪器 HF-200电子天平(赛多利斯公司)；SHZ(Ⅲ)循环水式真空泵(河南省予华仪器有限公司)；YLS-Q4耳肿打孔器(济南盖延科技发展有限公司)；402A1型鱼跃牌超声雾化器(江苏鱼跃医疗设备股份有限公司)；MK3型全自动酶标仪(德国Thermo公司)。
2 方法
2.1 药品制备 制川乌与川贝或浙贝分别按均匀设计的不同剂量配比混合后加入圆底烧瓶中，加10倍量蒸馏水，浸泡1 h；电热套加热，第1煎1.5 h，过滤；第2煎加8倍量的蒸馏水，煎煮1.5 h，过滤；合并2次滤液。60 ℃旋蒸浓缩，浓缩到实验所需要体积，4 ℃备用。
2.2 分组与给药 将制川乌、川贝或浙贝分别作为考察因素，每个因素各设7个水平，按均匀设计U7(72)及其使用表进行安排，共得7种配比，具体见表1。以前期探索的制川乌镇痛抗炎作用的有效剂量、川贝或浙贝镇咳祛痰作用的有效剂量为依据，确定制川乌剂量范围为0.16～21.6 g·kg-1、川贝为0.03～15 g·kg-1、浙贝为0.2～15 g·kg-1。
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表1 2因素7水平均匀设计表U7(72)
Table 1 2 factors and 7 levels of uniform design table U7(72)
雄性ICR小鼠150只，体重(20±2) g，随机分为15组，每组10只，即模型组，配伍A，B，C，D，E，F，G，H，A′，B′，C′，D′，E′，F′，G′，H′组，各配伍组按表2或3设计的剂量灌胃给药，按10 g体重0.2 mL给药，同时模型给予生理盐水对照。
表2 制川乌与川贝配伍均匀设计剂量表
Table 2 The dose proportion of Aconiti Radix Cocta and Fritillaria cirrhosa based on uniform design, 百拇医药(谭淑芳 刘春芳 王春生 王丹华 张彦琼 林娜)