1在造血干/祖细胞连续移植中对抗细胞衰老的作用研究> 人参皂苷Rg1在造血干/祖细胞连续移植(2)
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2.3 受体鼠造血重建后骨髓细胞Y染色体(Sry基因)检测 提取受体鼠骨髓细胞总RNA,紫外分光光度计测定总RNA的吸光度(A)A260/A280,1%凝胶电泳鉴定完整性。引物设计如下,Sry F:GAAAAGCCTTACAGAAGCCGA,R:GTATGTGATGGCATGTGGGTTC。将总RNA反转录为相应的cDNA,荧光定量PCR反应体系50 μL:2×PCR buffer 25 μL,25 μmol·L-1 Sry上游及下游引物各0.6 μL,cDNA 1 μL,Sybr green I 0.3 μL,DEPC水22.5 μL。反应条件:94 ℃ 4 min;94 ℃ 20 s,60 ℃ 30 s,72 ℃ 30 s,循环35次;72 ℃检测荧光信号。每个样本做3个平行管。2.4 血常规检测及受体鼠生存时间观察 各组受体鼠移植后第30天,摘眼球取血,用血细胞分析仪检测血常规(WBC,HCT,PLT) ......
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