积雪苷柔性纳米脂质体的制备与表征分析(1)
[摘要]积雪苷是中药积雪草的有效成分，临床主要用于促进手术创面愈合和瘢痕修复，治疗效果明显。然而其透皮吸收差和作用时间短限制了药物的推广应用。本实验采用逆相-挤出-冻干法制备积雪苷柔性脂质体冻干制剂，测定了其电镜结构、粒径、Zeta电位、包封率、载药量、稳定性和药物释放特征，并采用智能透皮吸收仪测定柔性脂质体膏体的体外透皮作用。积雪苷柔性脂质体为白色球状，pH 7.03，粒径70.14 nm，Zeta电位-36.5 mV，3批样品的平均包封率为31.43%，3批冻干样品每1 mg含积雪苷的平均值为0.134 mg，显示积雪苷柔性脂质体具有良好的理化性质和药学特征，并且提高了药物的透皮性能。
[关键词]柔性纳米脂质体；积雪苷；制备；表征
[摘要]积雪苷是中药积雪草的有效成分，临床主要用于促进手术创面愈合和瘢痕修复，治疗效果明显。然而其透皮吸收差和作用时间短限制了药物的推广应用。本实验采用逆相-挤出-冻干法制备积雪苷柔性脂质体冻干制剂，测定了其电镜结构、粒径、Zeta电位、包封率、载药量、稳定性和药物释放特征，并采用智能透皮吸收仪测定柔性脂质体膏体的体外透皮作用。积雪苷柔性脂质体为白色球状，pH 7.03，粒径70.14 nm，Zeta电位-36.5 mV，3批样品的平均包封率为31.43%，3批冻干样品每1 mg含积雪苷的平均值为0.134 mg，显示积雪苷柔性脂质体具有良好的理化性质和药学特征，并且提高了药物的透皮性能。
, 百拇医药
[关键词]柔性纳米脂质体；积雪苷；制备；表征
积雪苷是从伞形科植物积雪草Centella asiatica中提取出的一种白色针状结晶，有清热解毒和促进伤口愈合作用，临床上使用的剂型有片剂和软膏，主要用于治疗手术创伤、烧伤、外伤、瘢痕修复等[1-3]。通常情况下，活性物相对分子质量越小，越容易透过皮肤，一旦相对分子质量大于600，活性物就很难被皮肤吸收了。柔性脂质体由卵磷脂和其他柔性成分(如胆酸钠、丙二醇)组成，变形能力比普通脂质体大5个数量级，可穿过自身大小1/5的小孔，转运各种极性药物透过皮肤，具有柔韧性好、渗透性强的特点[4]。制备成具有促透性能的纳米级包裹体，不仅能促进生物活性物质的皮肤透过性能，还可以提高其稳定性，是极具发展潜力的透皮给药系统之一。本实验制备了积雪苷柔性脂质体，测试了其理化性质、包封率、载药量、稳定性和药物释放特征，并与其他制剂对比研究了体外透皮性能。
1材料
, 百拇医药
nano ZS90激光粒度和Zeta电位分析仪(Malvern Zetasizer)；高效液相仪(Waters公司)；电子显微镜(美国FEI公司)；EF-C5高压均质机(AVESTIN)；LL3000冷冻干燥机(Thermo)；智能透皮吸收装置(上海新诺仪器厂)；ZRS-8溶出试验仪(天津市天大天发科技有限公司)。
卵磷脂(日本日油株式会社)；胆固醇(分析纯，天津市大茂化学试剂厂)；硬脂酰胺(Sigma公司)；积雪苷(上海医药工业研究院提供)；其他试剂均为国产分析纯或符合药用标准。
2方法与结果
2.1脂质体制备方法
采用改良的逆相挤出冻干法制备脂质体[5]，即称取适量的卵磷脂、胆固醇、Vit E、积雪草苷置于100 mL圆底烧瓶中，加无水乙醇和氯仿，40 ℃水浴震荡致溶。35 ℃旋转蒸发除去有机溶剂，形成一层薄膜贴于烧瓶壁上，加入含有胆酸钠、甘露醇的PBS 5 mL水合30 min。加入20粒玻璃珠震荡，将脂质体悬液分散均匀。高压均质机4次后用0.22 μm微孔滤膜过滤。所得溶液在-40 ℃下预冻过夜，冷冻干燥24 h制得脂质体冻干粉，于4 ℃保存备用。
, 百拇医药
2.2外观结构
目测：脂质体混悬液为均匀乳白色；冻干脂质体(未加冻干保护剂)为淡黄色海绵状松散粉末或块状；加入冻干保护剂的为流动性良好的白色粉末。
电镜：在透射电镜下观察，制备的脂质体为小多室脂质体；扫描电镜下，未加冻干保护剂的脂质体为白色蜡块状，加冻干保护剂的脂质体为白色球状，见图1。
2.3脂质体的pH、粒径和Zeta电位
积雪苷柔性纳米脂质体的pH 7.03，粒径70.14 nm，Zeta电位-36.5 mV(积雪苷表面吸附缓冲液中阴离子的表现)，见图2。
2.4包封率和载药量检测
2.4.1积雪苷测定方法的建立 色谱条件：Waters SYMMETRY C18色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 (m)；流动相甲醇-水(58∶42)，流速 1 mL·min-1；检测波长205 nm；柱温35 ℃；进样量20 (L。积雪苷保留时间约为8.9 min。
, 百拇医药
线性关系考察：在空白脂质体PBS溶液中精密加入不同量的积雪苷对照品溶液，使其质量浓度分别为0.5，2.5，10.0，25.0，50.0，100.0 mg·L-1。按样品处理与测定方法进行测定，以样品质量浓度(X)与峰面积(Y)进行回归，得回归方程Y=158.76X+48.92，r 0.999 24，表明积雪苷在0.5～100.0 mg·L-1线性关系良好。
2.4.2包封率和载药量的测定 取未分离游离药的脂质体和透析6 h后的接收液各1.0 mL于10 mL量瓶中，加入0.2 mL 10% TritonX-100，加PBS至刻度，采用2.4.1项下条件测定总积雪苷量和游离积雪苷量。按下式计算脂质体的包封率(encapsulation efficiency，EE)和载药量(drug loading，DL)。EE=(脂质体总药物质量-游离药物质量)/脂质体总药物质量×100%，经计算，3批样品的平均包封率为31.43%。DL=(脂质体总药物质量-游离药物质量)/脂质体质量×100%，3批冻干样品每1 mg脂质体的平均载药量为0.134 mg。, 百拇医药(任艳 贺兴冬 尚北城 鲍秀坤 王艳芳 马吉胜)
[关键词]柔性纳米脂质体；积雪苷；制备；表征
[摘要]积雪苷是中药积雪草的有效成分，临床主要用于促进手术创面愈合和瘢痕修复，治疗效果明显。然而其透皮吸收差和作用时间短限制了药物的推广应用。本实验采用逆相-挤出-冻干法制备积雪苷柔性脂质体冻干制剂，测定了其电镜结构、粒径、Zeta电位、包封率、载药量、稳定性和药物释放特征，并采用智能透皮吸收仪测定柔性脂质体膏体的体外透皮作用。积雪苷柔性脂质体为白色球状，pH 7.03，粒径70.14 nm，Zeta电位-36.5 mV，3批样品的平均包封率为31.43%，3批冻干样品每1 mg含积雪苷的平均值为0.134 mg，显示积雪苷柔性脂质体具有良好的理化性质和药学特征，并且提高了药物的透皮性能。
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[关键词]柔性纳米脂质体；积雪苷；制备；表征
积雪苷是从伞形科植物积雪草Centella asiatica中提取出的一种白色针状结晶，有清热解毒和促进伤口愈合作用，临床上使用的剂型有片剂和软膏，主要用于治疗手术创伤、烧伤、外伤、瘢痕修复等[1-3]。通常情况下，活性物相对分子质量越小，越容易透过皮肤，一旦相对分子质量大于600，活性物就很难被皮肤吸收了。柔性脂质体由卵磷脂和其他柔性成分(如胆酸钠、丙二醇)组成，变形能力比普通脂质体大5个数量级，可穿过自身大小1/5的小孔，转运各种极性药物透过皮肤，具有柔韧性好、渗透性强的特点[4]。制备成具有促透性能的纳米级包裹体，不仅能促进生物活性物质的皮肤透过性能，还可以提高其稳定性，是极具发展潜力的透皮给药系统之一。本实验制备了积雪苷柔性脂质体，测试了其理化性质、包封率、载药量、稳定性和药物释放特征，并与其他制剂对比研究了体外透皮性能。
1材料
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nano ZS90激光粒度和Zeta电位分析仪(Malvern Zetasizer)；高效液相仪(Waters公司)；电子显微镜(美国FEI公司)；EF-C5高压均质机(AVESTIN)；LL3000冷冻干燥机(Thermo)；智能透皮吸收装置(上海新诺仪器厂)；ZRS-8溶出试验仪(天津市天大天发科技有限公司)。
卵磷脂(日本日油株式会社)；胆固醇(分析纯，天津市大茂化学试剂厂)；硬脂酰胺(Sigma公司)；积雪苷(上海医药工业研究院提供)；其他试剂均为国产分析纯或符合药用标准。
2方法与结果
2.1脂质体制备方法
采用改良的逆相挤出冻干法制备脂质体[5]，即称取适量的卵磷脂、胆固醇、Vit E、积雪草苷置于100 mL圆底烧瓶中，加无水乙醇和氯仿，40 ℃水浴震荡致溶。35 ℃旋转蒸发除去有机溶剂，形成一层薄膜贴于烧瓶壁上，加入含有胆酸钠、甘露醇的PBS 5 mL水合30 min。加入20粒玻璃珠震荡，将脂质体悬液分散均匀。高压均质机4次后用0.22 μm微孔滤膜过滤。所得溶液在-40 ℃下预冻过夜，冷冻干燥24 h制得脂质体冻干粉，于4 ℃保存备用。
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2.2外观结构
目测：脂质体混悬液为均匀乳白色；冻干脂质体(未加冻干保护剂)为淡黄色海绵状松散粉末或块状；加入冻干保护剂的为流动性良好的白色粉末。
电镜：在透射电镜下观察，制备的脂质体为小多室脂质体；扫描电镜下，未加冻干保护剂的脂质体为白色蜡块状，加冻干保护剂的脂质体为白色球状，见图1。
2.3脂质体的pH、粒径和Zeta电位
积雪苷柔性纳米脂质体的pH 7.03，粒径70.14 nm，Zeta电位-36.5 mV(积雪苷表面吸附缓冲液中阴离子的表现)，见图2。
2.4包封率和载药量检测
2.4.1积雪苷测定方法的建立 色谱条件：Waters SYMMETRY C18色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 (m)；流动相甲醇-水(58∶42)，流速 1 mL·min-1；检测波长205 nm；柱温35 ℃；进样量20 (L。积雪苷保留时间约为8.9 min。
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线性关系考察：在空白脂质体PBS溶液中精密加入不同量的积雪苷对照品溶液，使其质量浓度分别为0.5，2.5，10.0，25.0，50.0，100.0 mg·L-1。按样品处理与测定方法进行测定，以样品质量浓度(X)与峰面积(Y)进行回归，得回归方程Y=158.76X+48.92，r 0.999 24，表明积雪苷在0.5～100.0 mg·L-1线性关系良好。
2.4.2包封率和载药量的测定 取未分离游离药的脂质体和透析6 h后的接收液各1.0 mL于10 mL量瓶中，加入0.2 mL 10% TritonX-100，加PBS至刻度，采用2.4.1项下条件测定总积雪苷量和游离积雪苷量。按下式计算脂质体的包封率(encapsulation efficiency，EE)和载药量(drug loading，DL)。EE=(脂质体总药物质量-游离药物质量)/脂质体总药物质量×100%，经计算，3批样品的平均包封率为31.43%。DL=(脂质体总药物质量-游离药物质量)/脂质体质量×100%，3批冻干样品每1 mg脂质体的平均载药量为0.134 mg。, 百拇医药(任艳 贺兴冬 尚北城 鲍秀坤 王艳芳 马吉胜)