配伍对天麻中活性成分天麻苷元在大鼠体内分布的影响研究(1)
[摘要]该文采用高效液相色谱法测定各组织匀浆中天麻苷元的浓度，研究配伍前后天麻苷元在大鼠体内组织分布的变化，包括心、肝、脾、肺、肾、脑组织。研究表明天麻苷元在肾脏、肝脏、心脏、肺脏、脾脏、脑组织中均可分布，天麻、川芎配伍后，肝、肾中天麻苷元的含量不同程度的下降，肺、脑中含量上升，说明川芎对天麻活性成分天麻苷元的体内分布具有一定的影响，川芎能够促进天麻苷元向肺和脑组织分布。该文为天麻和川芎配伍治疗脑部疾病提供一定的科学依据。
[关键词]川芎；天麻；配伍；天麻苷元；组织分布
中药成分复杂，复方给药通常会发生药味成分之间的相互作用，使药物活性成分在体内的药动学行为发生改变[1-2]。川芎、天麻为治疗头痛的经典药对，具有活血化瘀、息风止痛的功效。其中，川芎[3]为伞形科多年生草本植物川芎Ligusticum chuanxiong Hort.的根茎，具有活血化瘀，行气开郁的功效；天麻[4]为兰科天麻属天麻Gastrodia elata Bl.的干燥块茎，具有平肝抑阳，息风止痉的作用。文献表明[5-6]，川芎具有“上行头目”的作用，常常与其他药物配伍治疗头痛。本文研究天麻川芎配伍前后天麻活性成分体内分布情况，探讨川芎天麻的配伍规律以及川芎引药上行的作用，从而为治疗脑部系统疾病的新药研究提供新思路和新方法。
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1材料
Agilent 1200 HPLC(包括脱气机，四元泵，柱温箱，VWA检测器)；Agilent LC系统化学工作站(美国Agilent公司)；KQ-300E超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；SIGMA 2K15C台式高速冷冻离心机(德国SIGMA公司)；BT-2000氮气吹干仪(北京八方世纪科技有限公司)。
川芎提取物(南京泽朗医药科技有限公司，批号100809)；天麻提取物(南京泽朗医药科技有限公司，批号SL20100103)；天麻苷元对照品(仪征市鼎信化工有限公司，质量分数为99.5%)；乙腈、甲醇为色谱纯；双蒸水(自制)。
SD大鼠体重(200±20) g，雌雄各半，由江西中医学院实验动物中心提供，合格证号SCXK(赣)2005-0001。
2方法
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2.1生物样品预处理方法[7] 取出组织样品剪碎，按质量的2倍量加生理盐水匀浆，于4 000 r·min-1，4 ℃离心15 min，得各组织匀浆液。
取各组织匀浆液1 mL置5 mL离心管中，加入3 mL甲醇-乙腈(1∶4)，涡旋震荡2 min，于12 000 r·min-1，4 ℃离心15 min，取上清液于40 ℃水浴N2吹干，残渣用100 μL流动相复溶，于12 000 r·min-1，4 ℃离心15 min，取上清液20 μL进样HPLC测定。
2.2色谱条件 Luna C18色谱柱(4.6 mm ×250 mm，5 μm)；流动相为乙腈-水(3∶97)；波长221 nm；柱温30 ℃；流速1 mL·min-1；进样量20 μL。
2.3数据分析 所有实验数据的测定值均以±s表示。实验数据处理采用药动学参数为DAS 2.0分析选用统计矩参数，采用GraphPad Prism 5 作图表，统计学分析使用SPSS 13.0进行配对t检验。
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2.4对照品溶液的配制 精密称取天麻苷元(gastrodigenin)对照品25 mg用流动相溶解并定容至25 mL量瓶中，配制成1 g·L-1的对照品溶液，即为对照品储备液，于4 ℃保存备用。
2.5专属性考察 取空白组织匀浆，以及加入适量天麻苷元和灌胃给药30 min后的心、肝、脾、肺、肾、脑组织匀浆，按2.1处理后，进样测定。结果表明在本实验的色谱条件下，方法专属性好，组织中内源性物质不干扰天麻苷元的检测，天麻苷元峰形较好，见图1(以大鼠脑组织为例)。
2.6标准曲线的制备 精密量取天麻苷元对照品储备液适量，用流动相稀释制备系列标准溶液，加入到大鼠心、肝、脾、肺、肾、脑组织匀浆液中，制成含一定量天麻苷元组织匀浆液样品然后按照生物样品预处理方法处理后进样分析，记录峰面积。以测得生物样品的峰面积(Y)对浓度(X)进行回归计算，得各组织匀浆样品中天麻苷元的标准曲线，见表1。
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2.7精密度考察 取心、肝、脾、肺、肾、脑组织匀浆液，精密加入天麻苷元对照品溶液适量，配制成含一定量天麻苷元高、中、低组织匀浆液。然后按2.1处理样品，同1 d平行测定6次，连续测定3 d，测得天麻苷元的峰面积，计算日内、日间精密度。结果高、中、低3个浓度的日内精密度RSD分别为4.0%，8.6%，12%及日间精密度RSD分别为5.9%，7.7%，9.7%，符合分析要求。
2.8回收率考察 取心、肝、脾、肺、肾、脑组织匀浆液，精密加入天麻苷元对照品溶液适量，配制成含一定量天麻苷元高、中、低3个浓度的组织匀浆液。另取一定体积心、肝、脾、肺、肾、脑组织匀浆液，按2.1处理后加入与前面相同量的对照品溶液，用流动相溶解制成含天麻苷元高、中、低3个浓度的组织匀浆液溶液，测定峰面积，2组进行比较，计算样品中天麻苷元的相对回收率。结果显示相对回收率为86.29%～101.5%，符合生物样品分析方法的要求。
2.9稳定性考察 取各组织匀浆，精密加入天麻苷元对照品溶液适量，制成含天麻苷元的高、中、低3个浓度的组织匀浆液。分别将样品在冰水浴中放置6 h和在48 h内反复冻融3次后按2.1处理，考察样品处理后在室温下放置0，12，24 h内的稳定性。结果显示样品中天麻苷元在24 h内没有明显减少(RSD为2.4%～10%)，表明样品稳定性较好。, 百拇医药(郑琴 熊文海 刘嘉宇 王亚琴 胡鹏翼 胡双 薛鑫 杨明)
[关键词]川芎；天麻；配伍；天麻苷元；组织分布
中药成分复杂，复方给药通常会发生药味成分之间的相互作用，使药物活性成分在体内的药动学行为发生改变[1-2]。川芎、天麻为治疗头痛的经典药对，具有活血化瘀、息风止痛的功效。其中，川芎[3]为伞形科多年生草本植物川芎Ligusticum chuanxiong Hort.的根茎，具有活血化瘀，行气开郁的功效；天麻[4]为兰科天麻属天麻Gastrodia elata Bl.的干燥块茎，具有平肝抑阳，息风止痉的作用。文献表明[5-6]，川芎具有“上行头目”的作用，常常与其他药物配伍治疗头痛。本文研究天麻川芎配伍前后天麻活性成分体内分布情况，探讨川芎天麻的配伍规律以及川芎引药上行的作用，从而为治疗脑部系统疾病的新药研究提供新思路和新方法。
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Agilent 1200 HPLC(包括脱气机，四元泵，柱温箱，VWA检测器)；Agilent LC系统化学工作站(美国Agilent公司)；KQ-300E超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；SIGMA 2K15C台式高速冷冻离心机(德国SIGMA公司)；BT-2000氮气吹干仪(北京八方世纪科技有限公司)。
川芎提取物(南京泽朗医药科技有限公司，批号100809)；天麻提取物(南京泽朗医药科技有限公司，批号SL20100103)；天麻苷元对照品(仪征市鼎信化工有限公司，质量分数为99.5%)；乙腈、甲醇为色谱纯；双蒸水(自制)。
SD大鼠体重(200±20) g，雌雄各半，由江西中医学院实验动物中心提供，合格证号SCXK(赣)2005-0001。
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2.1生物样品预处理方法[7] 取出组织样品剪碎，按质量的2倍量加生理盐水匀浆，于4 000 r·min-1，4 ℃离心15 min，得各组织匀浆液。
取各组织匀浆液1 mL置5 mL离心管中，加入3 mL甲醇-乙腈(1∶4)，涡旋震荡2 min，于12 000 r·min-1，4 ℃离心15 min，取上清液于40 ℃水浴N2吹干，残渣用100 μL流动相复溶，于12 000 r·min-1，4 ℃离心15 min，取上清液20 μL进样HPLC测定。
2.2色谱条件 Luna C18色谱柱(4.6 mm ×250 mm，5 μm)；流动相为乙腈-水(3∶97)；波长221 nm；柱温30 ℃；流速1 mL·min-1；进样量20 μL。
2.3数据分析 所有实验数据的测定值均以±s表示。实验数据处理采用药动学参数为DAS 2.0分析选用统计矩参数，采用GraphPad Prism 5 作图表，统计学分析使用SPSS 13.0进行配对t检验。
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2.4对照品溶液的配制 精密称取天麻苷元(gastrodigenin)对照品25 mg用流动相溶解并定容至25 mL量瓶中，配制成1 g·L-1的对照品溶液，即为对照品储备液，于4 ℃保存备用。
2.5专属性考察 取空白组织匀浆，以及加入适量天麻苷元和灌胃给药30 min后的心、肝、脾、肺、肾、脑组织匀浆，按2.1处理后，进样测定。结果表明在本实验的色谱条件下，方法专属性好，组织中内源性物质不干扰天麻苷元的检测，天麻苷元峰形较好，见图1(以大鼠脑组织为例)。
2.6标准曲线的制备 精密量取天麻苷元对照品储备液适量，用流动相稀释制备系列标准溶液，加入到大鼠心、肝、脾、肺、肾、脑组织匀浆液中，制成含一定量天麻苷元组织匀浆液样品然后按照生物样品预处理方法处理后进样分析，记录峰面积。以测得生物样品的峰面积(Y)对浓度(X)进行回归计算，得各组织匀浆样品中天麻苷元的标准曲线，见表1。
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2.7精密度考察 取心、肝、脾、肺、肾、脑组织匀浆液，精密加入天麻苷元对照品溶液适量，配制成含一定量天麻苷元高、中、低组织匀浆液。然后按2.1处理样品，同1 d平行测定6次，连续测定3 d，测得天麻苷元的峰面积，计算日内、日间精密度。结果高、中、低3个浓度的日内精密度RSD分别为4.0%，8.6%，12%及日间精密度RSD分别为5.9%，7.7%，9.7%，符合分析要求。
2.8回收率考察 取心、肝、脾、肺、肾、脑组织匀浆液，精密加入天麻苷元对照品溶液适量，配制成含一定量天麻苷元高、中、低3个浓度的组织匀浆液。另取一定体积心、肝、脾、肺、肾、脑组织匀浆液，按2.1处理后加入与前面相同量的对照品溶液，用流动相溶解制成含天麻苷元高、中、低3个浓度的组织匀浆液溶液，测定峰面积，2组进行比较，计算样品中天麻苷元的相对回收率。结果显示相对回收率为86.29%～101.5%，符合生物样品分析方法的要求。
2.9稳定性考察 取各组织匀浆，精密加入天麻苷元对照品溶液适量，制成含天麻苷元的高、中、低3个浓度的组织匀浆液。分别将样品在冰水浴中放置6 h和在48 h内反复冻融3次后按2.1处理，考察样品处理后在室温下放置0，12，24 h内的稳定性。结果显示样品中天麻苷元在24 h内没有明显减少(RSD为2.4%～10%)，表明样品稳定性较好。, 百拇医药(郑琴 熊文海 刘嘉宇 王亚琴 胡鹏翼 胡双 薛鑫 杨明)