昆仑雪菊与杭菊、贡菊主要活性成分比较(1)
[摘要] 用RP-HPLC法测定昆仑雪菊和杭菊、贡菊中绿原酸、3，5-O-二咖啡酰奎宁酸、木犀草苷和槲皮苷的含量。结果表明，昆仑雪菊和杭菊、贡菊主要活性成分相似，但不同活性成分含量差异显著，其中昆仑雪菊中绿原酸、木犀草苷及槲皮苷含量最高，质量分数分别为7.46 ，46.58，26.01 mg·g1，绿原酸和木犀草苷分别高于《中国药典》(2010年版)规定的2.00，0.80 mg·g1。杭菊中3，5-O-二咖啡酰奎宁酸含量最高，质量分数为14.70 mg·g1。通过该实验对昆仑雪菊活性的成分测定，为昆仑雪菊进一步研究、开发提供依据。
[关键词] 昆仑雪菊；杭菊；贡菊；绿原酸；3，5-O-二咖啡酰奎宁酸；木犀草苷；槲皮苷
昆仑雪菊为菊科蛇目菊属Sanvitalia植物蛇目菊S. procumbens Lam.干燥头状花序，原产美国中西部地区，目前我国新疆部分地区作为茶用和保健菊进行大面积栽培。昆仑雪菊又名“血菊”，维吾尔语“古丽恰尔”，《本草汇言》称其可“破血疏肝，解疔散毒”。目前昆仑雪菊作为药用菊花用于茶饮保健，其主要成分黄酮类化合物与咖啡酸衍生物作为自由基吸收剂都具有抗氧化作用[1-2]，具有清热解毒和降脂降压之功效[3-5]。目前国内外对昆仑雪菊的研究甚少，尤其是主要活性成分评价指标方面。本实验采用HPLC对昆仑雪菊和杭菊、贡菊主要成分进行对比测定，对昆仑雪菊进行初步质量评价，为昆仑雪菊进一步开发利用提供理论依据。
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1 材料
昆仑雪菊于2011年8月上旬采自新疆和田皮山县克里阳乡昆仑山区，海拔2 200 m左右。原植物经南京农业大学郭巧生教授鉴定为菊科植物蛇目菊S. procumbens；杭菊于2011年10月下旬采自浙江桐乡，贡菊于2011年10月下旬采自安徽歙县，经南京农业大学郭巧生教授鉴定为分别为菊科植物药用菊花Chrysanthemum morifolium Ramat.中的杭菊和贡菊。
Agilent 1120 一体式高效液相色谱仪(美国)，乙腈为色谱纯，磷酸为分析纯，纯净水为娃哈哈纯净水，绿原酸对照品(PCM-JYH-001-020，纯度≥98%，天津马克生物技术有限公司)，3，5-O-二咖啡酰奎宁酸对照品(PCM-JYH-007-020，纯度≥98%，天津马克生物技术有限公司)，木犀草苷对照品(PCM-JYH-002-020，纯度≥98%，天津马克生物技术有限公司)，槲皮苷对照品(PCM-GG-002-020，纯度≥98%，天津马克生物技术有限公司)。
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2 方法
2.1 供试品溶液的制备
取样品粉末(过1号筛)0.250 0 g精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇25 mL，密塞，称重，超声处理(功率300 W，频率45 kHz)40 min，放冷，再称重，用70%甲醇补足失重，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试溶液。
2.2 绿原酸、3，5-O-二咖啡酰奎宁酸、木犀草苷及槲皮苷对照品及标准曲线制备
精密称取绿原酸对照品、3，5-O-二咖啡酰基奎宁酸对照品、木犀草苷对照品及槲皮苷照品，70%甲醇溶解制成对照品母液。再分别吸取一定体积的各对照品母液于同一量瓶，加70%甲醇制成每1 mL含绿原酸35 μg，木犀草苷25 μg，3，5-O-二咖啡酰基奎宁酸80 μg，槲皮苷25 μg的混合溶液，0.45 μm滤膜滤过备用。
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精密量取绿原酸、3，5-O-二咖啡酰奎宁酸、木犀草苷及槲皮苷混合对照品溶液0，5，10 ，15，20 μL，依次进样分析，记录峰面积。以进样量(mg·L-1)为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，计算测定绿原酸、3，5-O-二咖啡酰奎宁酸、木犀草苷及槲皮苷含量线性关系见表1。
2.2 绿原酸、3，5-O-二咖啡酰奎宁酸、木犀草苷及槲皮苷含量测定
2.2.1 色谱条件 Agilent TC-C18(2)色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，以乙腈为流动相A，以0.1%磷酸溶液为流动相B，0～11 min，10%～18% A；11～30 min 18%～20 A；30～40 min，20%A；40～45 min，20%～10% A，进行梯度洗脱；流速1 mL·min1；检测波长350 nm；柱温25 ℃；进样量20 μL。色谱图见图1。
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2.2.2 精密度试验 取对照品溶液按2.2.1项中色谱法进样重复测定6次，绿原酸、3，5-O-二咖啡酰奎宁酸、木犀草苷及槲皮苷RSD(n=6)分别是0.18%，0.17%，0.19%，0.15%，结果显示精密度好。
2.2.3 稳定性试验 取对照品溶液于室温放置0，2，4，8，16，24 h后按2.2.1项中色谱法测定进样，绿原酸、3，5-O-二咖啡酰奎宁酸、木犀草苷及槲皮苷RSD(n=6)分别是1.3%，1.2%，1.8%，1.7%，结果显示稳定性好。
2.2.4 重复性试验 取雪菊样品粉末按2.1项方法制成供试溶液6份，按2.2.1项中色谱法测定进样，绿原酸、3，5-O-二咖啡酰奎宁酸、木犀草苷及槲皮苷RSD(n=6)分别是1.5%，1.7%，1.1%，1.3%，结果显示重复性好。
2.2.5 加样回收率试验 称取一定量的供试品，分别加入一定量绿原酸、3，5-O-二咖啡酰奎宁酸、木犀草苷及槲皮苷混合标准品溶液，按2.1项方法制成供试溶液6份，按2.2.1项中色谱法测定进样，绿原酸、3，5-O-二咖啡酰奎宁酸、木犀草苷及槲皮苷含量平均加样回收率分别是100.73%(RSD=1.3%，n=5)，99.74%(RSD=0.77%，n=5)，100.1%(RSD=0.27%，n=5)，100.0%(RSD=0.69%，n=5)，表明试验方法稳定可靠。, http://www.100md.com(王亮 汪涛 郭巧生 黄勇 徐浩坤)
[关键词] 昆仑雪菊；杭菊；贡菊；绿原酸；3，5-O-二咖啡酰奎宁酸；木犀草苷；槲皮苷
昆仑雪菊为菊科蛇目菊属Sanvitalia植物蛇目菊S. procumbens Lam.干燥头状花序，原产美国中西部地区，目前我国新疆部分地区作为茶用和保健菊进行大面积栽培。昆仑雪菊又名“血菊”，维吾尔语“古丽恰尔”，《本草汇言》称其可“破血疏肝，解疔散毒”。目前昆仑雪菊作为药用菊花用于茶饮保健，其主要成分黄酮类化合物与咖啡酸衍生物作为自由基吸收剂都具有抗氧化作用[1-2]，具有清热解毒和降脂降压之功效[3-5]。目前国内外对昆仑雪菊的研究甚少，尤其是主要活性成分评价指标方面。本实验采用HPLC对昆仑雪菊和杭菊、贡菊主要成分进行对比测定，对昆仑雪菊进行初步质量评价，为昆仑雪菊进一步开发利用提供理论依据。
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1 材料
昆仑雪菊于2011年8月上旬采自新疆和田皮山县克里阳乡昆仑山区，海拔2 200 m左右。原植物经南京农业大学郭巧生教授鉴定为菊科植物蛇目菊S. procumbens；杭菊于2011年10月下旬采自浙江桐乡，贡菊于2011年10月下旬采自安徽歙县，经南京农业大学郭巧生教授鉴定为分别为菊科植物药用菊花Chrysanthemum morifolium Ramat.中的杭菊和贡菊。
Agilent 1120 一体式高效液相色谱仪(美国)，乙腈为色谱纯，磷酸为分析纯，纯净水为娃哈哈纯净水，绿原酸对照品(PCM-JYH-001-020，纯度≥98%，天津马克生物技术有限公司)，3，5-O-二咖啡酰奎宁酸对照品(PCM-JYH-007-020，纯度≥98%，天津马克生物技术有限公司)，木犀草苷对照品(PCM-JYH-002-020，纯度≥98%，天津马克生物技术有限公司)，槲皮苷对照品(PCM-GG-002-020，纯度≥98%，天津马克生物技术有限公司)。
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2 方法
2.1 供试品溶液的制备
取样品粉末(过1号筛)0.250 0 g精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇25 mL，密塞，称重，超声处理(功率300 W，频率45 kHz)40 min，放冷，再称重，用70%甲醇补足失重，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试溶液。
2.2 绿原酸、3，5-O-二咖啡酰奎宁酸、木犀草苷及槲皮苷对照品及标准曲线制备
精密称取绿原酸对照品、3，5-O-二咖啡酰基奎宁酸对照品、木犀草苷对照品及槲皮苷照品，70%甲醇溶解制成对照品母液。再分别吸取一定体积的各对照品母液于同一量瓶，加70%甲醇制成每1 mL含绿原酸35 μg，木犀草苷25 μg，3，5-O-二咖啡酰基奎宁酸80 μg，槲皮苷25 μg的混合溶液，0.45 μm滤膜滤过备用。
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精密量取绿原酸、3，5-O-二咖啡酰奎宁酸、木犀草苷及槲皮苷混合对照品溶液0，5，10 ，15，20 μL，依次进样分析，记录峰面积。以进样量(mg·L-1)为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，计算测定绿原酸、3，5-O-二咖啡酰奎宁酸、木犀草苷及槲皮苷含量线性关系见表1。
2.2 绿原酸、3，5-O-二咖啡酰奎宁酸、木犀草苷及槲皮苷含量测定
2.2.1 色谱条件 Agilent TC-C18(2)色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，以乙腈为流动相A，以0.1%磷酸溶液为流动相B，0～11 min，10%～18% A；11～30 min 18%～20 A；30～40 min，20%A；40～45 min，20%～10% A，进行梯度洗脱；流速1 mL·min1；检测波长350 nm；柱温25 ℃；进样量20 μL。色谱图见图1。
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2.2.2 精密度试验 取对照品溶液按2.2.1项中色谱法进样重复测定6次，绿原酸、3，5-O-二咖啡酰奎宁酸、木犀草苷及槲皮苷RSD(n=6)分别是0.18%，0.17%，0.19%，0.15%，结果显示精密度好。
2.2.3 稳定性试验 取对照品溶液于室温放置0，2，4，8，16，24 h后按2.2.1项中色谱法测定进样，绿原酸、3，5-O-二咖啡酰奎宁酸、木犀草苷及槲皮苷RSD(n=6)分别是1.3%，1.2%，1.8%，1.7%，结果显示稳定性好。
2.2.4 重复性试验 取雪菊样品粉末按2.1项方法制成供试溶液6份，按2.2.1项中色谱法测定进样，绿原酸、3，5-O-二咖啡酰奎宁酸、木犀草苷及槲皮苷RSD(n=6)分别是1.5%，1.7%，1.1%，1.3%，结果显示重复性好。
2.2.5 加样回收率试验 称取一定量的供试品，分别加入一定量绿原酸、3，5-O-二咖啡酰奎宁酸、木犀草苷及槲皮苷混合标准品溶液，按2.1项方法制成供试溶液6份，按2.2.1项中色谱法测定进样，绿原酸、3，5-O-二咖啡酰奎宁酸、木犀草苷及槲皮苷含量平均加样回收率分别是100.73%(RSD=1.3%，n=5)，99.74%(RSD=0.77%，n=5)，100.1%(RSD=0.27%，n=5)，100.0%(RSD=0.69%，n=5)，表明试验方法稳定可靠。, http://www.100md.com(王亮 汪涛 郭巧生 黄勇 徐浩坤)