1.2.2 铁皮石斛HSP70基因全长克隆 根据本实验室之前利用SCoT分子标记方法筛选出的HSP70基因片段^[10]，分别设计RACE 3′和 5′引物(表1)，参照RACE试剂盒SMARTTM RACE cDNA Amplification Kit说明书进行cDNA末端快速扩增。PCR反应程序为：94 ℃ 5 min；94 ℃ 30 s，68 ℃ 30 s，72 ℃ 2 min，25个循环；72 ℃ 10 min。PCR产物经1%琼脂糖凝胶电泳检测后，利用凝胶试剂盒回收目标片段，连接pGEM-T Easy载体并转化大肠杆菌抗DH5α菌株，经蓝白斑筛选、菌液PCR及质粒酶切鉴定为阳性克隆后送交生工生物工程(上海)有限公司测序。

    1.2.3 铁皮石斛HSP70基因全长拼接与PCR验证 利用DNAMAN 6.0将已获得HSP70序列和RACE技术获得的末端序列进行拼接，根据拼接得到的cDNA全长序列设计全长引物(表1)，利用反转录的cDNA第一链为模版，进行HSP70基因全长cDNA 的PCR扩增。PCR反应体系20 μL，其中cDNA模板2 μL ......