2.4 Real-time PCR检测mRNA水平 取50～100 mg移植瘤组织，Trizol法提取总RNA，Nanodrop 2000分光光度计测定RNA浓度，确定RNA的纯度及浓度，A₂₆₀/A₂₈₀在1.8～2.0。按试剂盒说明进行PCR逆转录后，荧光定量PCR仪进行扩增。以管家基因GAPDH为内参基因，设计引物如下：Survivin上游引物5′-CTACCGAGAACGAGCCTGATT-3′，下游引物5′-AGCCTTCCAATTCCTTAAAGCAG-3′，扩增产物长度60 bp；VEGF上游引物5′-TTTGGCAAATACAACCCTTCAGA-3′，下游引物5′-GCAGAAGATACTGTCACCACC-3′，扩增产物长度133 bp；EGFR上游引物5′-ATGAAAACACCTATGCCTTAGCC-3′，下游引物5′-TAAGTTCCGCATGGGCAGTTC-3′，扩增产物长度83 bp；GAPDH上游引物5′-AGGTCGGTGTGAACGGATTTG-3′ ......