满天星异荭草苷对大鼠酒精性肝纤维化保护作用的实验研究(2)
血清中HA,LN,PCIII的含量采用放射免疫测定法(RIA)检测。肝组织中Hyp的含量测定严格按照试剂盒的说明书进行操作。2、6 Western blot检测肝组织中α-SMA表达水平 用总蛋白提取试剂盒提取各组肝组织的总蛋白,Bradford法对蛋白样品进行定量。 取出30 μg蛋白样品至EP管中,加入4×SDS上样缓冲液至终浓度为1×SDS,95 ℃煮10 min进行蛋白质变性,再进行100 g·L-1的SDS-PAGE凝胶电泳,然后将蛋白质转至硝酸纤维膜上,用50 g·L-1的脱脂牛奶于4 ℃封闭过夜后,分别用α-SMA抗体(1∶200),β-actin (1∶1 000)4 ℃孵育过夜,然后加入辣根过氧化物酶标记的山羊抗小鼠-IgG抗体(1∶1万)室温2 h。最后加ECL发光剂于暗室充分反应后用胶片曝光。将每个样本所测得的α-SMA蛋白灰度值,分别与对应的β-actin蛋白的灰度值相比,计算二者灰度比值。
2、7 肝组织中TGF-β1的检测 分别取各组50 mg肝组织 ......
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