颠茄托品烷生物碱合成途径基因表达分析与生物碱积累研究(2)
如上所述,尽管TAs生物合成途径脉络已基本阐明,但主要是基于对模式植物的研究,至今颠茄中也只有上游PMT和下游H6H基因得到了克隆并进行了生化分析。本文通过对新近完成的颠茄转录组数据库进行整合分析,绘制了上述9个基因EST序列的数字组织表达谱,并利用qRT-PCR技术对其中已发布的4个基因的组织表谱进行了验证,同时结合HPLC同步检测了相应组织中的莨菪碱和东莨菪碱含量,以全面了解颠茄TAs生物合成和存储积累,同时为解决该途径中不清晰的合成步骤和研究该途径的转录调控提供理论基础。1 材料与方法
1.1 颠茄 颠茄种子由西南大学生命科学学院“重庆市甘薯工程技术研究中心”保存,植株种植于西南大学温室。在颠茄生长花果期,从3株不同植株中分别采取根、老茎、嫩茎、老叶、幼叶、花、幼果和果萼共8个部位,40 ℃烘干研磨成粉,用于提取生物碱。绘制组织表达谱的材料则更加细致地采集11个器官的材料,依次为主根、须根、老叶、幼叶、嫩茎、花蕾、花瓣、花蕊、花萼、果萼和幼果,液氮速冻后-80 ℃保存用于提取RNA。
1.2 数字表达谱绘制 美国密歇根州立大学新近发布的药用植物基因组学资源网站(http://medicinalplantgenomics.msu.edu/)完成了基于高通量测序的颠茄各组织/器官的转录组数据 ......
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