北柴胡糖基转移酶基因BcUGT3,BcUGT6的表达分析及其原核表达(2)
2.3qRT-PCR扩增每个样品取相同量RNA(1.2 μg)利用PrimeScript RT reagent kit 分别进行反转录。反应体系40 μL,反应条件:37 ℃,15 min;85 ℃,5 s;迅速降至4 ℃。反转录产物用NanoDrop ND 2000测定含量,用反转录试剂盒中的Easy Dilution溶液稀释至100 mg·L-1。以其为模板,利用SYBR PrimeScriptRT-PCR kitⅡ试剂盒进行qPCR。反应体系为试剂盒中的Premix溶液5 μL,正反向引物(表1)各0.2 μL(10 μmol·L-1),模板0.8 μL,ddH2O补足至10 μL。反应程序为95 ℃,3 min;95 ℃,30 s,58 ℃,20 s,40个循环;95 ℃,1 min,58 ℃,1 min;55~95 ℃,每循环增加0.5 ℃ ......
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