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编号:13141285
牡丹皮对AGEs诱导的系膜细胞增殖及基底膜增厚的影响(2)
http://www.100md.com 2014年2月1日 《中国中药杂志》 2014年第3期
     2 方法

    2.1 AGEs的孵育 精密称取5 g牛血清白蛋白(BSA) 和9 g D-葡萄糖,加入100 mL无菌的玻璃容器中,以0.2 mol·L-1磷酸盐缓冲液(PBS,pH 7.2) 100 mL溶解。溶解液过0.22 μm滤膜过滤。密封状态于37 ℃下孵育3个月。取出棕色反应液,在PBS溶液中透析除去小分子化合物,获得糖基化终产物(AGEs)。

    2.2 细胞培养 将MC细胞接种在25 cm2的培养瓶中,以不完全DMEM(低糖)培养基(含10%胎牛血清)培养,置于37 ℃, 95%空气5%CO2浓度培养箱中,每2 d更换1次培养基。细胞长至80%~90%融合度时,用于进一步实验。

    2.3 细胞给药及病理模型的建立 将处于对数生长期的细胞消化后,接种于6孔培养板中,每孔2 mL细胞悬液,孵育24 h,弃去培养基。实验时设空白组:牛血清白蛋白(10 μmol·L-1);模型组:AGEs(200 mg·L-1);阳性组:AG(10 μmol·L-1) +AGEs (200 mg·L-1);高剂量组:丹皮(2×10-4 g·mL-1)+AGEs (200 mg·L-1);中剂量组:丹皮(1×10-4 g·mL-1)+AGEs(200 mg·L-1);低剂量组:丹皮(0.5×10-4 g·mL-1)+AGEs(200 mg·L-1) ......
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