双相体系中固定化酶水解黄芩苷制备黄芩素的研究(2)
2.4.3 米氏常数Km[12] 分别吸取5 mmol·L-1的黄芩苷溶液0.8,2,3,4 mL于10 mL量瓶中,定容至刻度,配制成0.4,0.8,1.2,1.6 mmol·L-1的黄芩苷溶液。分别以上述黄芩苷溶液为底物,在最适反应温度和最适反应pH条件下测定其酶活,根据Linewaeaver-Burk双倒数法计算米氏常数。2.4.4 pH稳定性 将游离酶和固定化酶分别置于pH 2.0,3.0,4.0,5.0,6.0,7.0,8.0,9.0,10.0的醋酸缓冲液中,在最适反应温度条件下水浴保温1 h,然后按2.1项下测定方法测定酶活力。
2.4.5 热稳定性 将游离酶和固定化酶分别置于不同温度中(30,40,50,60,70,80,90 ℃)水浴保温1 h,然后按2.1项下测定方法测定相应的酶活力。
2.5 β-葡萄糖苷酶水解黄芩苷
2.5.1 单相反应 取黄芩苷0.5 g,置三角烧瓶中,加入一定量游离β-葡萄糖苷酶和醋酸缓冲液200 mL ......
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