2.6 实时荧光定量PCR测定 使用Primer 3.0设计引物，由上海生工生物工程技术服务有限公司合成，引物序列信息见表1。取2.5 μg 总RNA，按照First Strand cDNA Synthesis Kit提供的方法逆转录合成cDNA。以cDNA 为模板，采用SYBR Green 方法对待测基因VEGF-A，VEGF-C和MMP-9进行实时荧光定量PCR测定。反应条件：95 ℃预变性10 min，95 ℃变性15 s，60 ℃退火30 s，72 ℃扩增30 s，共40个循环。利用绝对定量法，通过构建标准曲线，以管家基因GAPDH为参照物，分析VEGF-A，VEGF-C，MMP-9基因的表达水平。

    2.7 VEGF-A和VEGF-C基因表达的变化 血管内皮生长因子(VEGF)是体内、体外血管生成的主要调节因子，促进内皮细胞生长、增殖、迁移和形成血管管型结构 ......