牵牛子酒提取物对Lewis肺癌的抗肿瘤和抗转移机制研究(2)
2.3 细胞自噬检测 取对数生长期LLC细胞,用0.25%胰酶消化,调整细胞数2×105个/mL,以每孔2 mL接于6孔板中,细胞于含10%胎牛血清的DMEM培养基中5%CO2,37 ℃培养24 h后去除培养基,添加含不同质量浓度牵牛子酒提取物(0,7.5,15 mg·L-1)的低血清DMEM培养基(含胎牛血清1%)每孔2 mL,每组设3个平行孔。24 h后,除去培养基,PBS洗细胞3次,加入6 mg·L-1的吖啶橙(AO)染液每孔400 μL,5%CO2,37 ℃培养箱内染色20 min,吸出AO,PBS冲洗细胞3 次后,在荧光显微镜下观察并拍照。2.4 细胞间连接通讯 取对数生长期的LLC细胞,以2×105个/mL接种于6孔板,每孔2 mL,细胞于含10%胎牛血清的DMEM培养基中5%CO2,37 ℃培养24 h后 ......
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