白木香乙酰乙酰基辅酶A硫解酶基因(AsAACT)的克隆与表达分析(2)
1.3 AACT核心片段的扩增 根据白木香转录组高通量测序结果(罗氏公司应用RNA测序平台454 GS FLX Titanium完成cDNA文库测序)，由一段已知的AACT unigene序列(Cluster58172.seq.Contig1)设计一对引物AACT-S. 5′-CGACTTATTTCTCTGCTGCTTT-3′，AACT-A. 5′- TGCTGCTGCTCCATCACT -3′，用于AACT核心片段扩增；反应条件为0.2 mL的PCR管中加入0.5 μL的TaKaRa LA Taq (5 U·μL-1)，5 μL的10×LA PCR缓冲液(Mg2+ Plus)，8 μL 的dNTP Mixture(各2.5 mmol·L-1)、引物AACT-S (20 μmol·L-1)和AACT-A(20 μmol·L-1)各1.0 μL ......
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