HPLC测定荣心丸中的5种化学成分(1)
[摘要]该文通过HPLC建立了同时测定荣心丸(五味子、丹参)中五味子醇甲，丹参酮Ⅰ，隐丹参酮、丹参酮ⅡA，五味子乙素5种有效成分的方法。Agilent C18色谱柱，以甲醇-水为流动相，线性梯度洗脱，体积流量1.0 mL·min-1；柱温30 ℃；检测波长240 nm。五味子醇甲，丹参酮Ⅰ，隐丹参酮，丹参酮ⅡA，五味子乙素分别在3.000～48.00(r=1.000)，3.985～63.76(r=0.999 9)，6.370～101.9(r=1.000)，8.690～139.0(r=0.999 9)，1.700～27.20 mg·L-1(r=0.999 9)呈良好的线性关系，平均回收率分别为98.44%，100.3%，99.29%，99.07%，98.42%，RSD分别为0.60%，1.1%，0.52%，0.72%，0.97%。实验表明本方法简便、准确、重复性好，可同时测定荣心丸中5种化学成分。
[关键词]荣心丸；五味子醇甲；丹参酮Ⅰ；隐丹参酮；丹参酮ⅡA；五味子乙素；HPLC
, http://www.100md.com
荣心丸由玉竹、炙甘草、五味子、丹参、降香、山楂、廖大青叶、苦参组成，具有益气养阴、活血解毒的功效，用于气阴两虚或气阴两虚兼心脉淤阻所致的胸闷、心悸气短等症状，也用于病毒性心肌炎的治疗，收载于国家食品药品监督管理总局国家药品标准第65册[1]。该标准仅用HPLC对丹参酮ⅡA进行了质量控制，且样品处理方法也较繁琐。本试验参考相关方法[2-7]，选择五味子和丹参中五味子醇甲、五味子乙素、丹参酮Ⅰ、隐丹参酮、丹参酮ⅡA 5种有效成分，采用梯度洗脱，实现在同一系统中同一波长下同时检测，并对原标准中样品前处理的方法进行优化，缩短前处理时间，且结果更稳定。试验证明本方法简便、准确、重复性好，可用于荣心丸的质量控制。
1 材料
Agilent 1100 高效液相色谱仪，DAD检测器，Satious AG125 电子天平。
五味子醇甲(批号 110857-200709)、五味子乙素(批号110765-201205)、丹参酮I(批号0867-200205)、隐丹参酮(批号110852-200806)、丹参酮ⅡA (批号110766-200609)均由中国食品药品检定研究院提供；甲醇为色谱纯；荣心丸(上海玉丹药业有限公司，国药准字Z10970095，批号110802，120302，130201，130601，120602)。
, 百拇医药
2 方法与结果
2.1 色谱条件 Agilent C18色谱柱(4.6 mm×250 mm，2.7 μm)；流动相甲醇(A)-水(B)，线性梯度洗脱，0～8 min，49%A；8～10 min，49%～62% A；10～32 min，62% A。体积流量1.0 mL·min-1；检测波长240 nm；柱温30 ℃；进样量5 μL。
2.2 溶液的制备 对照品溶液的制备：精密称取五味子醇甲、隐丹参酮、丹参酮ⅡA对照品适量，加甲醇溶解制成每1 mL中含五味子醇甲300.0 μg、隐丹参酮637.0 μg、丹参酮ⅡA 869.0 μg的混合溶液，作为对照品溶液①；取丹参酮Ⅰ、五味子乙素对照品，加甲醇制成每1 mL中含丹参酮Ⅰ 79.70 μg、五味子乙素34.0 μg的混合溶液，作为对照品溶液②。
供试品溶液的制备：取本品适量，剪碎，混合均匀，精密称取4 g，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL，密塞，称定质量，超声10 min使分散，浸渍30 min，继续超声30 min，放冷，称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，静止，取上清液用0.45 μm微孔滤膜过滤，即得。
, 百拇医药
阴性对照溶液的制备：按厂方提供的处方中药味的比例及工艺，再按供试品溶液的制备方法制成不含五味子和丹参的阴性对照溶液。
2.3 专属性试验 吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液各5 μL，按上述色谱条件分别进样，结果供试品溶液中在五味子醇甲、丹参酮Ⅰ、隐丹参酮、丹参酮ⅡA、五味子乙素对照品色谱相同的保留时间处均有相应的色谱峰，各峰与相邻峰之间的分离度均大于2.0，理论板数均大于6 000，阴性对照溶液显示在各对照品主峰保留位置均无相应的干扰峰。说明供试品中其他成分对检测结果均无影响。色谱图见图1。
2.4 线性关系考察 取对照品浓溶液适量，加甲醇制成如下表线性范围的浓度，依法操作，以质量浓度(X)为横坐标，峰面积(Y)为纵坐标，进行线性回归，结果见表1。
2.5 精密度试验 精密吸取批号为130201的供试品溶液，按上述色谱条件重复进样6次，记录色谱峰面积，计算五味子醇甲、丹参酮Ⅰ、隐丹参酮、丹参酮ⅡA、五味子乙素峰面积的RSD分别为0.83%，0.77%，0.63%，0.67%，0.57%，表明精密度良好。
, 百拇医药
2.6 稳定性试验 精密吸取批号为130201的供试品溶液，按上述条件分别于0，4，8，12，24 h测定，记录色谱峰面积，计算五味子醇甲、丹参酮Ⅰ、隐丹参酮、丹参酮ⅡA、五味子乙素峰面积的RSD分别为1.5%，1.2%，0.98%，1.9%，1.3%，表明供试品溶液在24 h内稳定。
2.7 重复性试验 精密称取3号样品，取6份，按照供试品溶液制备方法制备，测定，计算结果，五味子醇甲、丹参酮Ⅰ、隐丹参酮、丹参酮ⅡA、五味子乙素峰面积的RSD分别为0.98%，0.76%，0.98%，0.99%，0.70%，表明重复性良好。
2.8 回收率试验 精密称取批号为130201的供试品6份，每份2 g，分别精密加入对照品溶液①0.75，0.75，1.0，1.0，1.5，1.5 mL，对照品溶液②3.0，3.0，5.0，5.0，7.0，7.0 mL，另精密加入甲醇50 mL，按供试品溶液制备方法制备，上述测定条件测定，计算5种成分的回收率，见表2。, http://www.100md.com(储忠英 吴丽红 田兰)
[关键词]荣心丸；五味子醇甲；丹参酮Ⅰ；隐丹参酮；丹参酮ⅡA；五味子乙素；HPLC
, http://www.100md.com
荣心丸由玉竹、炙甘草、五味子、丹参、降香、山楂、廖大青叶、苦参组成，具有益气养阴、活血解毒的功效，用于气阴两虚或气阴两虚兼心脉淤阻所致的胸闷、心悸气短等症状，也用于病毒性心肌炎的治疗，收载于国家食品药品监督管理总局国家药品标准第65册[1]。该标准仅用HPLC对丹参酮ⅡA进行了质量控制，且样品处理方法也较繁琐。本试验参考相关方法[2-7]，选择五味子和丹参中五味子醇甲、五味子乙素、丹参酮Ⅰ、隐丹参酮、丹参酮ⅡA 5种有效成分，采用梯度洗脱，实现在同一系统中同一波长下同时检测，并对原标准中样品前处理的方法进行优化，缩短前处理时间，且结果更稳定。试验证明本方法简便、准确、重复性好，可用于荣心丸的质量控制。
1 材料
Agilent 1100 高效液相色谱仪，DAD检测器，Satious AG125 电子天平。
五味子醇甲(批号 110857-200709)、五味子乙素(批号110765-201205)、丹参酮I(批号0867-200205)、隐丹参酮(批号110852-200806)、丹参酮ⅡA (批号110766-200609)均由中国食品药品检定研究院提供；甲醇为色谱纯；荣心丸(上海玉丹药业有限公司，国药准字Z10970095，批号110802，120302，130201，130601，120602)。
, 百拇医药
2 方法与结果
2.1 色谱条件 Agilent C18色谱柱(4.6 mm×250 mm，2.7 μm)；流动相甲醇(A)-水(B)，线性梯度洗脱，0～8 min，49%A；8～10 min，49%～62% A；10～32 min，62% A。体积流量1.0 mL·min-1；检测波长240 nm；柱温30 ℃；进样量5 μL。
2.2 溶液的制备 对照品溶液的制备：精密称取五味子醇甲、隐丹参酮、丹参酮ⅡA对照品适量，加甲醇溶解制成每1 mL中含五味子醇甲300.0 μg、隐丹参酮637.0 μg、丹参酮ⅡA 869.0 μg的混合溶液，作为对照品溶液①；取丹参酮Ⅰ、五味子乙素对照品，加甲醇制成每1 mL中含丹参酮Ⅰ 79.70 μg、五味子乙素34.0 μg的混合溶液，作为对照品溶液②。
供试品溶液的制备：取本品适量，剪碎，混合均匀，精密称取4 g，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL，密塞，称定质量，超声10 min使分散，浸渍30 min，继续超声30 min，放冷，称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，静止，取上清液用0.45 μm微孔滤膜过滤，即得。
, 百拇医药
阴性对照溶液的制备：按厂方提供的处方中药味的比例及工艺，再按供试品溶液的制备方法制成不含五味子和丹参的阴性对照溶液。
2.3 专属性试验 吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液各5 μL，按上述色谱条件分别进样，结果供试品溶液中在五味子醇甲、丹参酮Ⅰ、隐丹参酮、丹参酮ⅡA、五味子乙素对照品色谱相同的保留时间处均有相应的色谱峰，各峰与相邻峰之间的分离度均大于2.0，理论板数均大于6 000，阴性对照溶液显示在各对照品主峰保留位置均无相应的干扰峰。说明供试品中其他成分对检测结果均无影响。色谱图见图1。
2.4 线性关系考察 取对照品浓溶液适量，加甲醇制成如下表线性范围的浓度，依法操作，以质量浓度(X)为横坐标，峰面积(Y)为纵坐标，进行线性回归，结果见表1。
2.5 精密度试验 精密吸取批号为130201的供试品溶液，按上述色谱条件重复进样6次，记录色谱峰面积，计算五味子醇甲、丹参酮Ⅰ、隐丹参酮、丹参酮ⅡA、五味子乙素峰面积的RSD分别为0.83%，0.77%，0.63%，0.67%，0.57%，表明精密度良好。
, 百拇医药
2.6 稳定性试验 精密吸取批号为130201的供试品溶液，按上述条件分别于0，4，8，12，24 h测定，记录色谱峰面积，计算五味子醇甲、丹参酮Ⅰ、隐丹参酮、丹参酮ⅡA、五味子乙素峰面积的RSD分别为1.5%，1.2%，0.98%，1.9%，1.3%，表明供试品溶液在24 h内稳定。
2.7 重复性试验 精密称取3号样品，取6份，按照供试品溶液制备方法制备，测定，计算结果，五味子醇甲、丹参酮Ⅰ、隐丹参酮、丹参酮ⅡA、五味子乙素峰面积的RSD分别为0.98%，0.76%，0.98%，0.99%，0.70%，表明重复性良好。
2.8 回收率试验 精密称取批号为130201的供试品6份，每份2 g，分别精密加入对照品溶液①0.75，0.75，1.0，1.0，1.5，1.5 mL，对照品溶液②3.0，3.0，5.0，5.0，7.0，7.0 mL，另精密加入甲醇50 mL，按供试品溶液制备方法制备，上述测定条件测定，计算5种成分的回收率，见表2。, http://www.100md.com(储忠英 吴丽红 田兰)