PMI基因作为选择标记的植物表达载体构建及转化白花丹参体系的建立(2)
2.3重组载体pCAMBIA1305-PMI 转化白花丹参选取10 d的丹参无菌苗叶片,接种于附加甘露糖和蔗糖不同浓度组合的不定芽诱导培养基中,设计7 个甘露糖-蔗糖(g·L-1),浓度组合为0∶30,5∶25,10∶20,15∶15,20∶10,25∶5,30∶0, 每处理接种外植体数为25 个,30 d 后观察统计,实验重复3次计算平均值
选取10 d的丹参无菌苗,将叶片剪成0.5 cm×0.5 cm的小块,置于MS+6-BA 1.5 mg·L-1+NAA0.1 mg·L-1固体培养基上,于25 ℃左右光照16 h/黑暗8 h的条件下预培养2 d。
重组载体pCAMBIA1305-PMI采用电击转化法导入根癌农杆菌LBA4404,4 ℃保存的平板上挑取含有pCAMBIA1305-PMI的LBA4404单菌落于新的含有50 mg·L-1 Rif(利福平)和50 mg·L-1 Kan的YEB培养基上 ......
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