柱前衍生化RP—HPLC测定鸡内金中16种氨基酸的含量(3)
氨基酸无紫外吸收,因此衍生化反应要充分,才能将氨基酸检测完全。衍生化试剂PITC保存时要防止与水接触, 且其会降低分析柱的寿命,衍生化后需要用正己烷萃取, 以尽量将其除去。氨基酸为两性物质, pH 对其分离度影响大,因此要保证流动相pH 的准确与稳定。色氨酸的测量需要碱水解条件,无法与其他氨基酸同时测量,故本文未做测量。鸡内金水解液中半胱氨酸含量极低,几乎未检出,本文也未做测量。蛋白质的水解条件较为激烈,某些不稳定氨基酸(Ser,Thr,Met)会出现不同程度的降解[1],为防止和减缓部分不稳定氨基酸的降解,水解前在样品中滴入几滴苯酚,也可有效帮助样品被盐酸溶液润湿,使水解充分。文献[1]采用水解方法在150 ℃水解1 h,但由于本实验所用安瓿在150 ℃时爆裂,故采用较温和的条件,于110 ℃水解24 h,以保证水解完全。
异硫氰酸苯酯具有较强毒性 ......
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