利用Gateway克隆技术构建丹参SmNAC1转录因子的RNAi表达载体(2)
2.4大肠杆菌转化 BP或LR重组反应的产物转化大肠杆菌DH5α感受态细胞，取50 μL冰浴上融化的感受态细胞，加入3 μL BP产物，轻轻混匀，在冰上放置30 min。42 ℃水浴热激45 s，然后快速转移到冰浴中2 min。向EP管中加入500 μL LB液体培养基，37 ℃，150 r·min-1培养1 h，使细菌复苏。取200 μL液体，在相应抗生素(卡那霉素Kan，50 g·L-1)LB平板筛选，37 ℃过夜。2.5BP反应阳性克隆PCR鉴定 加入卡那霉素的LB培养基上长出克隆菌落，挑取单克隆，放入到加入相同浓度的同样抗生素(卡那霉素Kan，50 g·L-1)的LB液体培养液中，37 ℃，250 r·min-1在摇床中摇6 h，做菌液PCR，使用M13正向和反向引物进行检测，将得到的正确位置条带的菌液进行测序，检测BP反应是否成功。
2.6质粒提取 挑取单克隆菌落，加入10 mL LB液体(含有相应的抗生素) ......
您现在查看是摘要页，全文长 4216 字符。