2.5大鼠脑组织HE染色 实验结束后，立即断头取脑，10%甲醛中固定，以由高至低梯度的乙醇进行洗脱，体积分数分别为70%，80%，90%，每种浓度乙醇中脱水1 h。100%乙醇中脱水2 h后在正丁醇中放置24 h。分别置于两缸同浓度二甲苯中各5 min，浸蜡包埋后切片，于光学显微镜下进行观察。正常脑组织神经元细胞排列整齐， 脑缺血大鼠神经元细胞排列紊乱，高倍镜下，可见凋亡细胞，细胞核呈深蓝色，形态各异，可见核固缩及碎裂，细胞浆淡染。

    2.6免疫组化检测脑组织中Bcl-2和Bax的表达 石蜡切片脱蜡水化后，按照免疫组化试剂盒操作：滴加试剂A 30 μL，室温孵育20 min，PBS冲洗，进行抗原修复，滴加试剂B 30 μL，室温孵育20 min，PBS冲洗，然后加一抗(兔抗大鼠Bcl-2和Bax多克隆抗体)湿盒4 ℃过夜；PBS冲洗后滴加试剂C 30 μL，室温孵育30 min，PBS冲洗DAB显色，自来水冲洗，苏木素复染，氨水返蓝，脱水透明后封片。显微镜下观察，胞浆中有棕黄色颗粒者为阳性细胞。用Image-pro软件分析计算各组阳性表达细胞的吸光度。

    2.7Western blotting检测脑组织内p-AKT和AKT蛋白的表达 脑缺血造模结束后立即断头取脑 ......