基于三色荧光探针的红花肾保护活性物质筛选研究(2)
2.2 盐酸阿霉素损伤HK-2细胞浓度的选择 用3种荧光探针FDA,MTR,Hoechst 33342对HK-2细胞进行标记,通过荧光强度的变化反映盐酸阿霉素对HK-2细胞的损伤程度。HK-2细胞以5 000个/孔接种于96孔板,置于细胞培养箱中孵育24 h使细胞贴壁。吸去旧培养液,每孔加入90 μL培养液,再依次加入10 μL含7.812 5,15.625,31.25,62.5,125,250,500,1 000 μmol·L-1盐酸阿霉素的培养液,实验另设溶剂对照组(含0.1% DMSO),每组3复孔,孵育24 h。吸去旧培养液,每孔加入100 μL含1.5 mg·L-1 FDA,1 mg·L-1 MTR及5 mg·L-1 Hoechst 33342的高糖DMEM基础培养基,37 ℃避光孵育15 min,按2.1操作获取每孔的荧光信息 ......
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