活性氧在密旋链霉菌Act12诱导丹参毛状根中丹参酮积累中的作用(2)
1.3 丹参毛状根中丹参酮的提取和HPLC定量 毛状根中丹参酮的提取:干燥毛状根研钵中磨碎,过0.45 mm筛,精密称取0.10 g,加入1 mL甲醇,超声提取45 min,提取液1万 r·min-1离心15 min,取上清液过0.45 μm滤膜,备用。含量测定采用Waters 1525二元高效液相色谱仪,Waters 2996二极管阵列检测器进行检测,色谱柱为Waters SunFire C18 (4.6 mm×250 mm,5 μm),数据采集软件为Empower2。色谱条件为:流速1 mL·min-1, 柱温30 ℃, 上样体积 20 μL, 检测波长270 nm,流动相乙腈和水,梯度洗脱。梯度程序:0~5 min, 40%~60% 乙腈; 5~20 min, 60% 乙腈; 20~23 min, 60%~80% 乙腈; 23~25 min, 80%~100% 乙腈; 25~30 min ......
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