水飞蓟发状根培养体系的建立及其水飞蓟宾含量的测定(2)
1.5 水飞蓟发状根增殖液体培养基的筛选在无菌条件下将假酸浆在固体培养基中长出分枝多且长的发状根剪下,分别放入到MS,1/2MS,White,R2的液体培养基中开始进行增殖培养,培养液20 mL装在(50 mL三角瓶),称取约为0.15 g鲜重接放入每瓶培养液中,在温度为28 ℃,转速为120 r·min-1的摇床中暗培养,依次平行重复做3次,对三角瓶中发状根增殖情况进行持续观察,最终筛选出最为适合水飞蓟发状根增值的液体培养基。
1.6 水飞蓟发状根中水飞蓟宾含量的测定
参照文献[1]的方法进行。色谱条件与系统适用性试验:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以甲醇-水-冰醋酸(48∶52∶1)为流动相;检测波长为287 nm。对照品溶液的制备:取水飞蓟宾对照品(曼斯特生物制品有限公司)适量,精密称定,加甲醇制成每1 mL含0.12 mg的溶液,即得。供试品溶液的制备:取干燥的种皮、植物和发根粉末(过3号筛)各0.5 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入75%甲醇50 mL,称重,加热回流30 min ......
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