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编号:13126904
1,Rg1和Re调控Raf—CREB,Akt—CREB,CaMKⅡ—CREB信号转导通路的体外研究> (3)
http://www.100md.com 2014年6月1日 《中国中药杂志》 2014年第11期
1,Rg1和Re调控Raf—CREB,Akt—CREB,CaMKⅡ—CREB信号转导通路的体外研究'> 人参皂苷Rb1,Rg1和Re调控Raf—CREB,Akt—CREB,CaMKⅡ—CREB信号转导通路的体外研究
     3.2 重组质粒的成功构建 重组质粒pcDNA3.1-Raf/Akt/cAMP/CaMK/-Luc-CREB用HindⅢ和BamHⅠ双酶切后内部存在HindⅢ和BamHⅠ酶切位点。在50 μL反应体系中经酶切鉴定结果出现了1个与理论值相符的条带2 000 bp,测序结果亦显示酶切鉴定正确的质粒准确插入DNA片段,其序列也正确,见图1。

    3.3 CREB报告基因活性的检测 Rb1和Rg1能激活Raf-CREB和Akt-CREB通路上游的靶点增加CREB的报告基因活性,Re能激活Raf-CREB和CaMKⅡ-CREB通路上游的靶点增加CREB的报告基因活性,与未转染上游靶点基因的CREB组相比有显著差异(P<0.01),见图2。

    3.4 CREB蛋白的表达 Rb1和Rg1给药组中与未转染细胞通路上游靶点基因的CREB组相比,转染了Raf和Akt靶点的Raf-CREB组和Akt-CREB组中的CREB蛋白表达量明显增加 ......
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