2.4 退火温度优化 利用正交试验所获得的最优反应体系对引物UBC811的退火温度进行梯度实验，以筛选其最适退火温度。在Bio-red梯度Bio-red PCR仪S1000上，设置退火温度范围46～56 ℃，自动生产46，46.9，48.3，50.0，52.3，54.1，55.3，56.0 ℃ 8个温度梯度，每个温度梯度作3个重复。

    2.5 优化反应体系稳定性测定 选取重庆南川、重庆开县、四川遂宁等不同产地的23份金钱草样品，对优化的ISSR-PCR体系进行稳定性检测。

    3 结果与分析

    3.1 DNA提取 高纯度的DNA可提高ISSR-PCR的准确性。24份金钱草材料中提取的DNA经1%琼脂糖电泳检测，呈清晰、明亮的均一条带，见图1。经紫外分光光度计检测，DNA样品A260/A280均在1.8～2.0，说明提取的DNA具有良好的完整性，纯度较高，可作为ISSR-PCR反应的模板使用。

    3.2 单因素试验 模板DNA量在10，30，50 ng时扩增出的条带数多且较为清晰明亮，随着模板浓度的增加，条带数减少，亮度降低。引物浓度在0.2，0.3 μmol·L-1时较其余浓度处理条带多 ......