天山雪莲悬浮培养细胞中紫丁香苷、绿原酸和1,5—二咖啡酰奎尼酸的生物合成调控(2)
1.5 天山雪莲细胞悬浮培养生物量及目标成分产量积累动态 采用附加0.5 mg ·L-1 NAA,0.5 mg ·L-1 6-BA,0.2 mg ·L-1 2,4-D,500 mg·L-1 L-苯丙氨酸和50 g·L-1蔗糖的MS液体培养基,培养条件同细胞悬浮培养,接种后每2 d随机取样3瓶。测定细胞生物量及目标成分含量和产量。1.6 细胞生物量的测定 减压抽滤分离培养液得到培养细胞,蒸馏水洗3遍,55 ℃烘干至恒重,称量得培养细胞的干重生物量(g·L-1)。
1.7 含量测定 取干燥至恒重的天山雪莲培养细胞,研细,过40目筛,精密称取细粉约100.0 mg,置于具塞试管中,用70%甲醇10 mL超声提取15 min,用甲醇补足失重,0.45 μm滤膜过滤,通过HPLC同时测定紫丁香苷、绿原酸和1,5-二咖啡酰奎尼酸的含量。Shiseido capcell pak C18 MGⅡ色谱柱(4.6 mm×250 mm ......
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