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编号:13125842
连翘苷人工抗原的合成及免疫原性鉴定(2)
http://www.100md.com 2014年6月15日 《中国中药杂志》 2014年第12期
     2.2.5 icELISA法测定血清中的抗体特异性 以FRn-OVA作为包被原,用CBS稀释至1∶1 000,每孔加100 μL,37 ℃孵育2 h。以PBST洗板,每次5 min,共3次,然后拍干。以10 g·L-1明胶为封闭液,每孔加200 μL,37 ℃孵育1 h。洗板。抗血清稀释倍数为2 000,FRn分别稀释为100,50,25,12.5,6.25,3,1 mg·L-1和对照值0 mg·L-1,每孔分别加入小分子和抗血清各50 μL。37 ℃孵育1 h,洗板。每孔加入100 μL HRP-羊抗鼠二抗(1∶10 000),37 ℃孵育0.5 h,洗板。每孔加入TMB使用液100 μL,37 ℃孵育显色15 min后每孔加2 mmol·L-1硫酸50 μL终止反应,测定A450 nm。

    3 结果

    3.1 FRn-BSA,FRn-OVA的紫外光谱鉴定

    FRn,FRn-BSA,BSA ......
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