枯草芽孢杆菌ge25菌株发酵及其抑菌活性成分的初步研究(2)
用混菌法测定各处理组抑菌活性:在距平皿中心对称2 cm处摆放牛津杯,倒入混有人参黑斑菌孢子悬液的PDA培养基,待培养基凝固后取出牛津杯,每孔分别加入100 μL待测液,静置过夜,28 ℃倒置培养,每种处理设3次重复。3 d后观察抑菌效果,测量抑菌圈半径。以未进行处理的发酵上清液和抑菌粗提物为阳性对照,用无菌水作为阴性对照。2.4脂肽粗提物的薄层色谱分析及其生物自显影 取0.1 g干燥脂肽粗提物溶于2 mL甲醇,分别点样于TLC板(GF254)上,以二氯甲烷-甲醇-水(4∶1∶0.2)为展开剂展开,挥干溶剂后,板b直接喷洒0.2%茚三酮乙醇试剂显色,板c置于新鲜饱和浓盐酸蒸气中110 ℃加热水解1 h,冷却后挥干盐酸,喷洒0.2%茚三酮乙醇试剂显色,板a点样成条带状,浇盖混有人参黑斑菌孢子悬浮液的PDA,恒温倒置培养3 d后观察抑菌斑点所在位置。
2.5脂肽粗提物对人参致病菌的抑制作用 以人参黑斑菌、人参锈腐菌、人参灰霉菌为靶标菌,用菌饼法测定脂肽粗提物对人参致病菌的抑制作用。以无菌PBS溶液为空白对照(CK),每种处理设3次重复。静置过夜,28 ℃倒置培养,待阴性对照长满后观察抑菌效果,测量菌落半径,计算抑菌率。
2.6数据分析 通过SPSS 19.0软件中的单因素方差分析结合LSD法对统计结果进行P<0.05水平的方差分析 ......
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