苦菊提取物对HepG2细胞的抗氧化作用及其机制研究(2)
2.4细胞内ROS水平的检测 取对数生长期的HepG2细胞，用0.25%的胰酶消化液消化细胞后，用含10%FCS的DMEM培养基将细胞悬液调至1×106个/mL，接种于6孔板内，每孔2 mL。置于37 ℃，5% CO2培养箱中培养24 h。按2.2项进行分组处理，置于37 ℃，5%CO2培养箱中孵育1 h，在检测前30 min加入DCFH-DA(终浓度为50 μmol·L-1)。检测时，细胞换液为2 mL的PBS，在激发波长为485 nm，发射波长为530 nm的荧光酶标仪中检测荧光强度值，并随后于荧光倒置显微镜中拍照。2.5ARE报告基因测定 Cignal慢病毒ARE报告子(Cignal lenti ARE reporter)是一种受Nrf1和Nrf2调控的ARE重复序列并且能够表达荧光素酶(Luciferase)的基因。本研究应用该基因报告子试剂盒制作HepG2细胞模型 ......
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