1.7MALDI-TOF-TOF-MS质谱分析 将差异蛋白质点从凝胶上切下，先后进行脱色、酶解、萃取、脱盐、低温真空离心等处理，并将其全部点到质谱仪上分析。MALDI-TOF-MS分析采用反射模式，正离子谱测定，激光源为355 nm波长的Nd：YAG激光器，加速电压为20 KV，获取质量扫描范围为700～3 500 Da。质谱使用胰蛋白酶自动降解离子峰作为内部标准校正，获得肽质量指纹图谱(PMF) 。通过Mascot软件在NCBInr数据库中进行肽指纹图谱检索。蛋白质功能检索时采用用NCBI 数据库和SWISS-PROT 蛋白质数据库。

    1.8Western blotting 用NP40裂解细胞，提取细胞总蛋白。按照碧云天的试剂盒说明书抽提细胞浆蛋白。进行SDS电泳后电转移至聚偏氟乙烯(PVDF)膜上，5%脱脂奶粉室温封闭1 h。1∶1 000的一抗4 ℃孵育过夜。二抗(1∶5 000)室温孵育1 h，最后加入化学发光剂进行检测，X线片暗室曝光，常规显影定影。

    1.9细胞转染 p CMV6-AC-Hsp27和p CMV6-AC质粒从OriGene Technologies (Rockville ......