吴茱萸次碱对胰岛素抵抗骨骼肌细胞炎症因子表达的影响(2)
2 方法2.1 原代骨骼肌细胞的培养
原代骨骼肌细胞的培养采用组织块法进行培养[8],并作相关改进。取新生3 d的SD大鼠,断头,浸泡在75% 乙醇中消毒2 min,无菌纸擦干。在超净台中去皮,剪下四肢,去爪,将四肢置入PBS(含双抗)中清洗2遍。剪掉脂肪并除去骨骼,取其肌肉组织用DMEM培养基清洗2遍。用眼科剪将肌肉组织剪成1 mm3左右的碎块,将组织小块移到无菌细胞培养皿中,均匀排布,组织块间隔0.5 cm左右,将培养皿倒置放入37 ℃,5% CO2培养箱,2.5 h后翻转,加入含10% 胎牛血清的DMEM/F10(1∶1)培养基,细胞长满培养皿80%面积时用0.25%胰蛋白酶消化,并分别过200目,400目灭菌不锈钢筛网传代,取第3~6代骨骼肌细胞用于实验。
2.2 MTT 法观察Rut对原代骨骼肌细胞增殖的影响
细胞用胰酶洗脱细胞后 ......
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