梓醇抑制NADPH氧化酶保护2型糖尿病早期血管内皮功能(2)
2.4 主动脉ROS测定 取小段胸主动脉,研磨组织后,按照genmed活体组织氧化应激活性氧(ROS)初级荧光测定试剂盒操作说明书检测主动脉ROS含量。2.5 主动脉HE染色 取小段胸主动脉,10%福尔马林固定,石蜡包埋后5 mm切片,HE染色,光镜下观察。
2.6 RT-PCR法检测主动脉Nox4,p22phox mRNA表达 取主动脉组织,Trizol提取总RNA,按逆转录试剂盒操作步骤进行RT反应,所得cDNA 在PCR 仪上进行扩增。2 μL 的cDNA 为模板,β-actin 为内参,PCR 反应参数:预变性95 ℃ 2 min,94 ℃变性30 s,56 ℃退火30 s和72 ℃延伸30 s,共32个循环,72 ℃延伸7 min。Nox4上游引物5′-TAGCTGCCCACTTGGTGAACG-3′,下游引物5′-TGTAACCATGAGGAACAATACCACC-3′,扩增长度为245 bp; p22phox上游引物5′-CTCTATTGTTGCAGGAGTGC-3′,下游引物5′-TCACACGACCTCATCTGTCAC-3′,扩增长度为455 bp ......
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