黄芩苷对鱼藤酮致PC12细胞损伤的保护作用研究(2)
1.7 ROS检测 将细胞用PBS缓冲液洗1次,然后加入荧光探针二氯荧光素-双乙酸盐(DCF-DA),终浓度为10 μmol·L-1,孵育30 min,弃去上清液,用PBS洗1次后在荧光显微镜下观察并照相。1.8 Western blot检测Bcl-2,Bax及Caspase-3蛋白变化 刮取细胞于3 000 r·min-1离心5 min,弃上清,加入适量细胞裂解液提取总蛋白,BCA法测定样品总蛋白含量。每组取总蛋白20 μg上样,于15%SDS-PAGE电泳分离,电泳完毕转移至PVDF膜上,3%BSA室温封闭2 h,分别加入不同一抗,4 ℃封闭过夜。TBST漂洗后加入相应的辣根过氧化物酶标记的二抗室温孵育1 h,TBST漂洗后加入ECL发光液进行显影,LAS-3000型化学发光成像系统采集图像。
1.9 数据统计 数据以±s表示,用SPSS 11.0统计软件包进行统计,组间均数比较采用单因素方差分析。
2 结果
2.1 黄芩苷对鱼藤酮诱导PC12细胞存活率降低的影响 本实验采用梯度浓度鱼藤酮与PC12细胞共孵育24 h ......
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