硫熏白芍的质量评价(1)
[收稿日期] 2014-03-11
[基金项目] 国家自然科学基金项目(81173506)；国家“重大新药创制”科技重大专项(2014ZX09304307-002)
[通信作者] *许玮仪，Tel：(010)67095424，E-mail：xuwy118@163.com；*马双成，Tel：(010)67095272，E-mail：masc@nifdc.org.cn
[作者简介] 王赵，硕士研究生，E-mail：wang_zhao_happy@yeah.net
[摘要] 以全国市场抽验的不同程度硫熏白芍及课题组自制的不同硫熏时间白芍为样本，通过比较白芍的硫熏程度与其性状，芍药苷、芍药苷亚硫酸酯的含量及其指纹图谱的变化，评价硫磺熏蒸对白芍质量的影响。该研究采用《中国药典》方法评价了硫熏白芍的性状，测定了其芍药苷含量，用LC-MS分析了芍药苷转化产物，建立基于HPLC的白芍指纹图谱检测方法，并以相似度评价了质量差异。结果显示硫磺熏蒸使白芍颜色变白，特有气味消失，产生刺鼻酸气，并对芍药苷含量有显著影响，随硫熏程度加剧，芍药苷含量明显下降，部分转化为芍药苷亚硫酸酯，而且这种变化是不可逆的。指纹图谱也有明显变化。说明硫熏对白芍质量产生了严重影响，应严格限定白芍的硫熏工艺。由实验可见，可以通过测定芍药苷亚硫酸酯的含量来控制白芍的硫熏程度。
, http://www.100md.com
[关键词] 硫磺熏蒸；白芍；质量评价；指纹图谱
硫磺熏蒸是目前广泛使用的一种粗放的药材产地初加工方法，具有利于干燥、防虫、方便贮存等作用，也有不法商贩将硫熏用于保持药材颜色美观。目前市售有近百种药材有硫熏现象。硫磺是法定允许限量使用的食品添加剂[1]，但过度硫熏无疑具有严重安全隐患。《中国药典》2010年版第二增补本，将党参、白芍等10种药材作为允许适度硫熏的品种，并在其药材及饮片品种项下增加了亚硫酸盐残留(以二氧化硫计)的限量要求，不超过400 mg·kg-1。近年来，中药材硫磺过度熏蒸问题被屡次曝光，在社会上引起极大反响。目前，人们更多关注的是硫磺熏蒸引起的安全性隐患，但硫熏对药材质量也可能产生严重影响，因此对于《中国药典》中允许适度熏蒸的药材，有必要逐一开展质量评价，保证其有效性。
白芍为毛茛科植物芍药Paeonia lactiflora Pall.的干燥根，具有补血柔肝、平肝止痛、敛阴收津等功效，分别为杭白芍、亳白芍、川白芍，在我国应用历史悠久。其主要有效成分为芍药苷(paeoniflorin)、芍药内酯苷(albiflorin)、氧化芍药苷(oxypaeoniflorin)、苯甲酰芍药苷(benzoylpaeoniflorin)，统称为白芍总苷(total glucosides of paeony，TGP)[2]。现代研究发现白芍总苷(TGP)有抗炎镇痛、调节免疫、治疗风湿性关节炎等作用[3-4]。本研究以全国市场抽验的不同程度硫熏白芍及课题组自制的不同硫熏时间白芍为样本，以《中国药典》方法评价白芍性状，测定芍药苷含量，建立基于HPLC的白芍指纹图谱检测方法，以相似度评价质量差异，对于指纹图谱中检测到的硫熏后产生的特征成分，以LC-MS分析其结构及转化途径。研究探讨了硫熏法对白芍质量的影响，为建立科学合理的白芍产地初加工与炮制方法提供科学依据，也为客观评价中药材白芍的质量和完善国家法定标准做一些有益的探索。
, 百拇医药
1 材料
高效液相色谱仪(四元泵、柱温箱、紫外检测器、岛津色谱工作站)、电子分析天平、超声波清洗仪、 Agilent 1200 (配有DAD检测器)及Agilent 6320 Ion Trap型质谱仪。
芍药苷对照品(含量测定用，中国食品药品检定研究院，批号110736-201337)，乙腈为色谱纯，水为去离子水，其他试剂均为分析纯。
样品来源：①2013年国家评价性抽验中来源于全国不同地区的硫熏白芍药材或饮片样品33批次；②课题组自行购置的未经硫熏白芍10 kg，甘肃省定西市食品药品检验所按照当地农民操作习惯，模拟制备0～48 h不同硫熏时间的硫熏白芍对照样品。
2 方法与结果
对全国抽验的白芍样品和本课题组委托自制的不同硫熏时间白芍样品，就其性状变化、指标成分含量变化、指纹图谱变化分别研究。
, 百拇医药
2.1 不同硫熏时间的白芍性状变化
取委托自制的不同硫熏时间的白芍样品，重点检查其外观颜色与气味，结果未熏的样品呈微粉红色，气微酸；硫熏后的样品逐渐变白，本身特有的气味消失，自熏蒸12 h开始，产生刺鼻酸腐气，说明硫磺熏蒸对白芍的颜色和气味产生了较大影响。
2.2 指标成分芍药苷的含量变化
按照2010年版《中国药典》“白芍”项下规定的芍药苷含量测定方法分别对全国抽验的13批二氧化硫残留量小于400 mg·kg-1的白芍样品和20批二氧化硫残留量大于400 mg·kg-1的白芍样品进行了测定，结果见图1。
结果表明，二氧化硫残留量与芍药苷含量呈现显著负相关。《中国药典》2010年版一部白芍项下规定芍药苷含量应不得少于1.6%，上述20批二氧化硫超标样品中仅1批样品符合要求，而13批二氧化硫未超标样品中，合格的样品达到11批。试验证明硫磺熏蒸对芍药苷有破坏作用，可导致芍药苷含量大幅明显下降。
本课题组按照产地药农操作习惯自制了0～48 h不同硫熏时间白芍样品，并测定了芍药苷含量，结果芍药苷含量随硫熏时间增加呈下降趋势，至硫熏48 h下降了16.5%，二氧化硫残留量增加为1 383 mg·kg-1。
2.3 白芍指纹图谱研究
2.3.1 指纹图谱检测方法的建立 采用《中国药典》中规定的芍药苷含量测定的方法得到了比较好的指纹图谱。色谱条件为：Kromasil 100-5C18色谱柱(4.6 mm×250 mm，0.5 μm)，流速1.0 mL·min-1，柱温30 ℃，流动相0.1%磷酸-乙腈(86∶14)，进样体积10 μL，分析时间18 min。, 百拇医药(王赵 陈玉武 王琼 孙磊 许玮仪 金红宇 马双成)
[基金项目] 国家自然科学基金项目(81173506)；国家“重大新药创制”科技重大专项(2014ZX09304307-002)
[通信作者] *许玮仪，Tel：(010)67095424，E-mail：xuwy118@163.com；*马双成，Tel：(010)67095272，E-mail：masc@nifdc.org.cn
[作者简介] 王赵，硕士研究生，E-mail：wang_zhao_happy@yeah.net
[摘要] 以全国市场抽验的不同程度硫熏白芍及课题组自制的不同硫熏时间白芍为样本，通过比较白芍的硫熏程度与其性状，芍药苷、芍药苷亚硫酸酯的含量及其指纹图谱的变化，评价硫磺熏蒸对白芍质量的影响。该研究采用《中国药典》方法评价了硫熏白芍的性状，测定了其芍药苷含量，用LC-MS分析了芍药苷转化产物，建立基于HPLC的白芍指纹图谱检测方法，并以相似度评价了质量差异。结果显示硫磺熏蒸使白芍颜色变白，特有气味消失，产生刺鼻酸气，并对芍药苷含量有显著影响，随硫熏程度加剧，芍药苷含量明显下降，部分转化为芍药苷亚硫酸酯，而且这种变化是不可逆的。指纹图谱也有明显变化。说明硫熏对白芍质量产生了严重影响，应严格限定白芍的硫熏工艺。由实验可见，可以通过测定芍药苷亚硫酸酯的含量来控制白芍的硫熏程度。
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[关键词] 硫磺熏蒸；白芍；质量评价；指纹图谱
硫磺熏蒸是目前广泛使用的一种粗放的药材产地初加工方法，具有利于干燥、防虫、方便贮存等作用，也有不法商贩将硫熏用于保持药材颜色美观。目前市售有近百种药材有硫熏现象。硫磺是法定允许限量使用的食品添加剂[1]，但过度硫熏无疑具有严重安全隐患。《中国药典》2010年版第二增补本，将党参、白芍等10种药材作为允许适度硫熏的品种，并在其药材及饮片品种项下增加了亚硫酸盐残留(以二氧化硫计)的限量要求，不超过400 mg·kg-1。近年来，中药材硫磺过度熏蒸问题被屡次曝光，在社会上引起极大反响。目前，人们更多关注的是硫磺熏蒸引起的安全性隐患，但硫熏对药材质量也可能产生严重影响，因此对于《中国药典》中允许适度熏蒸的药材，有必要逐一开展质量评价，保证其有效性。
白芍为毛茛科植物芍药Paeonia lactiflora Pall.的干燥根，具有补血柔肝、平肝止痛、敛阴收津等功效，分别为杭白芍、亳白芍、川白芍，在我国应用历史悠久。其主要有效成分为芍药苷(paeoniflorin)、芍药内酯苷(albiflorin)、氧化芍药苷(oxypaeoniflorin)、苯甲酰芍药苷(benzoylpaeoniflorin)，统称为白芍总苷(total glucosides of paeony，TGP)[2]。现代研究发现白芍总苷(TGP)有抗炎镇痛、调节免疫、治疗风湿性关节炎等作用[3-4]。本研究以全国市场抽验的不同程度硫熏白芍及课题组自制的不同硫熏时间白芍为样本，以《中国药典》方法评价白芍性状，测定芍药苷含量，建立基于HPLC的白芍指纹图谱检测方法，以相似度评价质量差异，对于指纹图谱中检测到的硫熏后产生的特征成分，以LC-MS分析其结构及转化途径。研究探讨了硫熏法对白芍质量的影响，为建立科学合理的白芍产地初加工与炮制方法提供科学依据，也为客观评价中药材白芍的质量和完善国家法定标准做一些有益的探索。
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1 材料
高效液相色谱仪(四元泵、柱温箱、紫外检测器、岛津色谱工作站)、电子分析天平、超声波清洗仪、 Agilent 1200 (配有DAD检测器)及Agilent 6320 Ion Trap型质谱仪。
芍药苷对照品(含量测定用，中国食品药品检定研究院，批号110736-201337)，乙腈为色谱纯，水为去离子水，其他试剂均为分析纯。
样品来源：①2013年国家评价性抽验中来源于全国不同地区的硫熏白芍药材或饮片样品33批次；②课题组自行购置的未经硫熏白芍10 kg，甘肃省定西市食品药品检验所按照当地农民操作习惯，模拟制备0～48 h不同硫熏时间的硫熏白芍对照样品。
2 方法与结果
对全国抽验的白芍样品和本课题组委托自制的不同硫熏时间白芍样品，就其性状变化、指标成分含量变化、指纹图谱变化分别研究。
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2.1 不同硫熏时间的白芍性状变化
取委托自制的不同硫熏时间的白芍样品，重点检查其外观颜色与气味，结果未熏的样品呈微粉红色，气微酸；硫熏后的样品逐渐变白，本身特有的气味消失，自熏蒸12 h开始，产生刺鼻酸腐气，说明硫磺熏蒸对白芍的颜色和气味产生了较大影响。
2.2 指标成分芍药苷的含量变化
按照2010年版《中国药典》“白芍”项下规定的芍药苷含量测定方法分别对全国抽验的13批二氧化硫残留量小于400 mg·kg-1的白芍样品和20批二氧化硫残留量大于400 mg·kg-1的白芍样品进行了测定，结果见图1。
结果表明，二氧化硫残留量与芍药苷含量呈现显著负相关。《中国药典》2010年版一部白芍项下规定芍药苷含量应不得少于1.6%，上述20批二氧化硫超标样品中仅1批样品符合要求，而13批二氧化硫未超标样品中，合格的样品达到11批。试验证明硫磺熏蒸对芍药苷有破坏作用，可导致芍药苷含量大幅明显下降。
本课题组按照产地药农操作习惯自制了0～48 h不同硫熏时间白芍样品，并测定了芍药苷含量，结果芍药苷含量随硫熏时间增加呈下降趋势，至硫熏48 h下降了16.5%，二氧化硫残留量增加为1 383 mg·kg-1。
2.3 白芍指纹图谱研究
2.3.1 指纹图谱检测方法的建立 采用《中国药典》中规定的芍药苷含量测定的方法得到了比较好的指纹图谱。色谱条件为：Kromasil 100-5C18色谱柱(4.6 mm×250 mm，0.5 μm)，流速1.0 mL·min-1，柱温30 ℃，流动相0.1%磷酸-乙腈(86∶14)，进样体积10 μL，分析时间18 min。, 百拇医药(王赵 陈玉武 王琼 孙磊 许玮仪 金红宇 马双成)