红花注射液化学成分及其活性研究(1)
[收稿日期] 2014-04-04
[基金项目] 中国食品药品检定研究院2012年中青年发展研究基金项目(2012A7)
[通信作者] *林瑞超， Tel：(010)67095896，Fax：(010)67095387， E-mail：linrch307@sina.com.cn
[作者简介] 赵剑锋， 硕士研究生， Tel：(010)67095993，Fax： (010)67095387， E-mail： zhaojianfengbest@126.com
[摘要] 采用多种色谱技术对红花注射液化学成分进行研究，从中分离鉴定16个化合物，经波谱学等方法鉴定为野黄芩苷(1)，山柰酚-3-O-β-芸香糖苷(2)，羟基红花黄色素A(3)，芦丁(4)，香豆酸(5)，腺苷(6)，紫丁香苷(7)，反式-1-(4′-羟基苯基)-丁-1-烯-3-酮(8)，(8Z)-癸烯-4， 6-二炔-1-O-β-D-葡萄糖苷(9)，对羟基苯甲醛(10)，(2E，8E)-十四烯-4， 6-二炔-1， 12， 14-三羟基-1-O-β-D-葡萄糖苷(11)，山柰酚-3-O-β-槐糖苷(12)，尿苷(13)，二氢红花菜豆酸(14)，肉桂酸(15) 和山柰酚(16)；其中，化合物1，2，7，9，11和12为首次从红花注射液中分离得到。家兔体外抗血小板聚集活性测试结果表明，除化合物5外，其余化合物均表现出不同程度的抗血小板聚集活性，以化合物2，3，9，12活性最强。
, http://www.100md.com
[关键词] 红花注射液；化学成分；抗血小板聚集活性
红花注射液由红花Carthamus tinctorius L.经水煮醇沉工艺加工而成，具有活血化瘀之功效，用于治疗闭塞性脑血管疾病，冠心病和脉管炎，临床疗效显著。但现有研究资料表明，除基本的药理、毒理及临床研究外，红花注射液活性成分的研究主要集中于羟基红花黄色素A[1]。为进一步阐明红花注射液的药效物质基础，在前期筛选建立功效相关生物活性测定方法的基础上[2-3]，本文采用多种色谱技术对红花注射液化学成分进行研究，从中分离鉴定了16个化合物，经波谱学等方法鉴定其结构为：野黄芩苷(1)，山柰酚-3-O-β-芸香糖苷(2)，羟基红花黄色素A(3)，芦丁(4)，香豆酸(5)，腺苷(6)，紫丁香苷(7)，反式-1-(4′-羟基苯基)-丁-1-烯-3-酮(8)，(8Z)-癸烯-4， 6-二炔-1-O-β-D-葡萄糖苷(9)，对羟基苯甲醛(10)，(2E，8E)-十四烯-4， 6-二炔-1， 12， 14-三羟基-1-O-β-D-葡萄糖苷(11)，山柰酚-3-O-β-槐糖苷(12)，尿苷(13)，二氢红花菜豆酸(14)，肉桂酸(15) 和山柰酚(16)；其中，化合物1，2，7，9，11和12为首次从红花注射液中分离得到；进一步考察了制剂及上述分离化合物的体外抗血小板聚集活性，除化合物5外，其余化合物均表现出不同程度的抗血小板聚集活性；首次报道除公认的羟基红花黄色素A(3) 外，黄酮苷2，12和多炔苷9具有较强地抗血小板聚集活性。
, 百拇医药
1 材料
INOVA-400，INOVA-500和VNS-600型核磁共振仪；Agilent 6320 Ion Trap液质联用色谱仪；Waters e2695液相色谱仪；Waters AutoPurification 系统；制备型反相色谱柱XBridge C18(19 mm × 150 mm， 10 μm)；分析型反相色谱Prevail C18柱(4.6 mm × 250 mm， 5 μm)；薄层色谱硅胶GF254及柱色谱用硅胶(100～200目)，青岛海洋化工厂；聚酰胺(30～60目)，江苏临江化学化学试剂厂；反相硅胶ODS(50 μm)，日本YMC公司；葡聚糖凝胶Sephadex LH-20，Amersham Pharmacia Biotech AB生产；色谱纯溶剂，Thermo Fisher公司；分析纯试剂，北京化工厂；水为超纯水，Millipore制备。
红花注射液，盐酸川芎嗪注射液(北京市永康药业有限公司，批号09100201)，氯化钠注射液(石家庄四药有限公司，批号081221161)，ADP(Helena Laboratories Beaumont，批号2-10-55189)，枸橼酸钠(柠檬酸三钠，国药集团化学试剂有限公司，批号F20080202)。大耳白兔，雄性，体重2.2 kg，清洁级，动物合格证号SCXK (京)2011-0010，由中国食品药品检定研究院实验动物资源中心提供。
, 百拇医药
2 方法
2.1 提取分离 取红花注射液样品20 L，经聚酰胺柱色谱纯化，用乙醇-水梯度洗脱(0∶100～95∶5)，得到4个组分(Fr.1～Fr.4)。组分Fr.3(56 g) 经硅胶柱色谱纯化，二氯甲烷-甲醇梯度洗脱(7∶1～0∶1) 得4个亚组分(Fr.3-1～Fr.3-4)；其中，Fr.3-1(3.6 g) 反复经Sephadex LH-20柱色谱纯化，甲醇洗脱，得化合物1(19 mg)，4(22 mg)，进一步经HPLC(乙腈-水15∶85)纯化，分别制备得化合物10(7 mg，tR=7 min)，11(10 mg，tR=12 min)，12(11 mg，tR=18 min)；Fr.3-2(10.3 g) 反复经Sephadex LH-20柱色谱(甲醇洗脱)和ODS柱色谱纯化，甲醇-水(1∶9～1∶0)梯度洗脱，得化合物2(120 mg)，3(153 mg)，13(23 mg)，15(58 mg)，16(15 mg)。Fr.1经正丁醇萃取，浓缩得粗浸膏(29 g)，进一步反复经Sephadex LH-20柱色谱纯化，甲醇洗脱，得化合物5(12 mg)，6(12 mg)，7(30 mg)，经HPLC以甲醇-水梯度洗脱(10∶90～40∶60) ，分别制备得化合物8(14 mg，tR=12 min)，9(15 mg，tR=17 min)， 14(35 mg，tR=25 min)。, 百拇医药(赵剑锋 刘静 郭颖 刘倩 戴忠 马双成 林瑞超)
[基金项目] 中国食品药品检定研究院2012年中青年发展研究基金项目(2012A7)
[通信作者] *林瑞超， Tel：(010)67095896，Fax：(010)67095387， E-mail：linrch307@sina.com.cn
[作者简介] 赵剑锋， 硕士研究生， Tel：(010)67095993，Fax： (010)67095387， E-mail： zhaojianfengbest@126.com
[摘要] 采用多种色谱技术对红花注射液化学成分进行研究，从中分离鉴定16个化合物，经波谱学等方法鉴定为野黄芩苷(1)，山柰酚-3-O-β-芸香糖苷(2)，羟基红花黄色素A(3)，芦丁(4)，香豆酸(5)，腺苷(6)，紫丁香苷(7)，反式-1-(4′-羟基苯基)-丁-1-烯-3-酮(8)，(8Z)-癸烯-4， 6-二炔-1-O-β-D-葡萄糖苷(9)，对羟基苯甲醛(10)，(2E，8E)-十四烯-4， 6-二炔-1， 12， 14-三羟基-1-O-β-D-葡萄糖苷(11)，山柰酚-3-O-β-槐糖苷(12)，尿苷(13)，二氢红花菜豆酸(14)，肉桂酸(15) 和山柰酚(16)；其中，化合物1，2，7，9，11和12为首次从红花注射液中分离得到。家兔体外抗血小板聚集活性测试结果表明，除化合物5外，其余化合物均表现出不同程度的抗血小板聚集活性，以化合物2，3，9，12活性最强。
, http://www.100md.com
[关键词] 红花注射液；化学成分；抗血小板聚集活性
红花注射液由红花Carthamus tinctorius L.经水煮醇沉工艺加工而成，具有活血化瘀之功效，用于治疗闭塞性脑血管疾病，冠心病和脉管炎，临床疗效显著。但现有研究资料表明，除基本的药理、毒理及临床研究外，红花注射液活性成分的研究主要集中于羟基红花黄色素A[1]。为进一步阐明红花注射液的药效物质基础，在前期筛选建立功效相关生物活性测定方法的基础上[2-3]，本文采用多种色谱技术对红花注射液化学成分进行研究，从中分离鉴定了16个化合物，经波谱学等方法鉴定其结构为：野黄芩苷(1)，山柰酚-3-O-β-芸香糖苷(2)，羟基红花黄色素A(3)，芦丁(4)，香豆酸(5)，腺苷(6)，紫丁香苷(7)，反式-1-(4′-羟基苯基)-丁-1-烯-3-酮(8)，(8Z)-癸烯-4， 6-二炔-1-O-β-D-葡萄糖苷(9)，对羟基苯甲醛(10)，(2E，8E)-十四烯-4， 6-二炔-1， 12， 14-三羟基-1-O-β-D-葡萄糖苷(11)，山柰酚-3-O-β-槐糖苷(12)，尿苷(13)，二氢红花菜豆酸(14)，肉桂酸(15) 和山柰酚(16)；其中，化合物1，2，7，9，11和12为首次从红花注射液中分离得到；进一步考察了制剂及上述分离化合物的体外抗血小板聚集活性，除化合物5外，其余化合物均表现出不同程度的抗血小板聚集活性；首次报道除公认的羟基红花黄色素A(3) 外，黄酮苷2，12和多炔苷9具有较强地抗血小板聚集活性。
, 百拇医药
1 材料
INOVA-400，INOVA-500和VNS-600型核磁共振仪；Agilent 6320 Ion Trap液质联用色谱仪；Waters e2695液相色谱仪；Waters AutoPurification 系统；制备型反相色谱柱XBridge C18(19 mm × 150 mm， 10 μm)；分析型反相色谱Prevail C18柱(4.6 mm × 250 mm， 5 μm)；薄层色谱硅胶GF254及柱色谱用硅胶(100～200目)，青岛海洋化工厂；聚酰胺(30～60目)，江苏临江化学化学试剂厂；反相硅胶ODS(50 μm)，日本YMC公司；葡聚糖凝胶Sephadex LH-20，Amersham Pharmacia Biotech AB生产；色谱纯溶剂，Thermo Fisher公司；分析纯试剂，北京化工厂；水为超纯水，Millipore制备。
红花注射液，盐酸川芎嗪注射液(北京市永康药业有限公司，批号09100201)，氯化钠注射液(石家庄四药有限公司，批号081221161)，ADP(Helena Laboratories Beaumont，批号2-10-55189)，枸橼酸钠(柠檬酸三钠，国药集团化学试剂有限公司，批号F20080202)。大耳白兔，雄性，体重2.2 kg，清洁级，动物合格证号SCXK (京)2011-0010，由中国食品药品检定研究院实验动物资源中心提供。
, 百拇医药
2 方法
2.1 提取分离 取红花注射液样品20 L，经聚酰胺柱色谱纯化，用乙醇-水梯度洗脱(0∶100～95∶5)，得到4个组分(Fr.1～Fr.4)。组分Fr.3(56 g) 经硅胶柱色谱纯化，二氯甲烷-甲醇梯度洗脱(7∶1～0∶1) 得4个亚组分(Fr.3-1～Fr.3-4)；其中，Fr.3-1(3.6 g) 反复经Sephadex LH-20柱色谱纯化，甲醇洗脱，得化合物1(19 mg)，4(22 mg)，进一步经HPLC(乙腈-水15∶85)纯化，分别制备得化合物10(7 mg，tR=7 min)，11(10 mg，tR=12 min)，12(11 mg，tR=18 min)；Fr.3-2(10.3 g) 反复经Sephadex LH-20柱色谱(甲醇洗脱)和ODS柱色谱纯化，甲醇-水(1∶9～1∶0)梯度洗脱，得化合物2(120 mg)，3(153 mg)，13(23 mg)，15(58 mg)，16(15 mg)。Fr.1经正丁醇萃取，浓缩得粗浸膏(29 g)，进一步反复经Sephadex LH-20柱色谱纯化，甲醇洗脱，得化合物5(12 mg)，6(12 mg)，7(30 mg)，经HPLC以甲醇-水梯度洗脱(10∶90～40∶60) ，分别制备得化合物8(14 mg，tR=12 min)，9(15 mg，tR=17 min)， 14(35 mg，tR=25 min)。, 百拇医药(赵剑锋 刘静 郭颖 刘倩 戴忠 马双成 林瑞超)