毛重楼的化学成分研究(1)
[收稿日期] 2014-05-04
[基金项目] 国家自然科学基金青年科学基金项目(81302654)
[通信作者] *王强，教授，E-mail：qwang49@sohu.com
[作者简介] 刘潇潇，副主任药师，Tel：(020)81886161，E-mail：cpulxx@126.com
[摘要] 采用硅胶柱色谱，Sephadex LH-20和ODS等色谱技术对毛重楼根茎进行化学成分研究，得到12个化合物。通过理化数据和波谱分析鉴定其结构分别为羽扇豆醇(1)，羽扇豆醇二十八烷酸酯(2)，棕榈酸(3)，α-棕搁酸单甘油酯(4)，α-菠甾醇(5)，薯蓣皂苷元(6)，(25R)diosgenin-3-O-α-L-rhamnopyranosyl(1→4)-α-L-rhamnopyranosyl(1→4)-[α-L-rhamnopyranosyl(1→2)]-β-D-glucopyranoside(7)，偏诺皂苷元(8)，(25R)pennogenin-3-O-β-D-glucopyranosyl(1→3)-[α-L-rhamnopyranosyl(1→2)]-β-D-glucopyranoside(9)，flazin(10)，calonysterone(11)，异鼠李素-3-O-β-龙胆二糖苷(12)。其中化合物1～5，10～11为首次从该属植物中分离得到，所有化合物为首次从该植物中分离得到。
, http://www.100md.com
[关键词] 毛重楼；重楼属；化学成分
毛重楼为延龄草科重楼属植物毛重楼Paris mairei Lévl的干燥根茎，主要分布在云南、四川和贵州，生长于海拔1 800～3 500 m的常绿阔叶林、松林、黄栎林等[1]。重楼属植物(Paris)极具药用价值，药理研究表明其具有止血、抗肿瘤、抗生育、免疫调节及治疗心血管疾病等作用，临床上用于治疗功能性子宫出血、神经性皮炎、外科炎症以及肿瘤等[2-6]。甾体皂苷是重楼属药用植物的主要活性成分，约占已分离鉴定总化合物的70%以上[5-6]。《中国药典》2010年版[7]收载滇重楼P. polyphylla Smith var. yunnanensis和华重楼P. polyphylla Smith var. chinensis作为药用，由于对这2种重楼的过度开发，其野生资源日益萎缩[8-9]。为了缓解重楼资源匮乏与药用需求日益增加的矛盾，寻找合适的重楼替代基源植物，扩大重楼属植物药用资源，对其相近属种植物毛重楼进行了化学成分研究。在前期工作基础上[10-11]，继续从毛重楼根茎的乙醇提取物中分离鉴定了12个化合物，其中化合物1～5，10～11为首次从该属植物中分离得到，所有化合物为首次从该植物中分离得到，为合理利用重楼属植物资源提供科学依据。
, 百拇医药
1 材料
X4型双目镜显微熔点测定仪(北京泰克仪器有限责任公司)；BRUKER AV 500型核磁共振仪(TMS为内标)；Agilent 1100 MSD Trap质谱仪；岛津MS7070E型质谱仪；Perkin Elmer 241Me旋光测定仪；大孔树脂HPD-100为河北沧州宝恩化工有限公司产品；Sephadex LH-20为Pharmacia公司产品；反相ODS填料(40～60 μm)为 Fuji公司产品；柱色谱分离硅胶和薄层色谱硅胶均为青岛海洋化工厂产品；所用试剂均为分析纯。
毛重楼P. mairei干燥根茎于2005年采自云南省，由中国药科大学王强教授鉴定，凭证标本(MAL020)存放于中国药科大学生药学教研室。
2 提取与分离
干燥毛重楼根茎15 kg，粉碎后用5倍量80%乙醇加热回流提取3次，每次4 h，合并提取液，减压浓缩，提取物用水混悬，依次用石油醚、氯仿、水饱和正丁醇萃取，分别得到石油醚提取物(23 g)、氯仿提取物(240 g)、正丁醇提取物(410 g)。
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石油醚提取物(23 g)经硅胶柱色谱分离，石油醚-乙酸乙酯(100∶0，9∶1，8∶2，7∶3，6∶4)梯度洗脱，分离纯化得到化合物2(10 mg)，3(45 mg)。氯仿提取物(240 g)经硅胶柱色谱分离，氯仿-甲醇(100∶0，95∶5，9∶1，8∶2，7∶3)梯度洗脱，得到流分PML1～PML5。流分PML2(44 g)经硅胶柱色谱分离，石油醚-丙酮(100∶0，95∶5，9∶1，8∶2，7∶3，6∶4)梯度洗脱，分离纯化得到化合物1(12 mg)，4(23 mg)，5(120 mg)，6(18 mg)，8(22 mg)。流分PML3(120 g)经硅胶柱色谱分离，氯仿-甲醇-水(100∶0∶0，95∶5∶0.2，90∶10∶0.5，80∶20∶1，70∶30∶2，60∶40∶3)梯度洗脱，得到流分PML301～PML306，PML303经反向ODS柱色谱分离，丙酮-水(100∶30，100∶50，100∶70)梯度洗脱，得到化合物7(35 mg)，9(15 mg)。正丁醇提取物(410 g)用水溶解，经大孔树脂HPD-100柱色谱分离，用水-乙醇(100∶0，8∶2，6∶4，4∶6，2∶8)梯度洗脱，得到流分PMZ1-PMZ5，流分PMZ3(130 g)经硅胶柱色谱分离，氯仿-甲醇-水(100∶0∶0，95∶5∶0.2，90∶10∶0.5，80∶20∶1，70∶30∶2，60∶40∶3)梯度洗脱，经Sephadex LH-20(氯仿-甲醇1∶1)纯化，得到化合物10(16 mg)，11(11 mg)，12(21 mg)。
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3 结构鉴定
化合物1 无色针晶(甲醇-氯仿)；mp 215～216 ℃；ESI-MS m/z 425[M-H]-；/1H-NMR(CDCl3，500 MHz) δ：0.76(3H，s，H-24)，0.79(3H，s，H-28)，0.83(3H，s，H-25)，0.94(3H，s，H-27)，0.97(3H，s，H-23)，1.03(3H，s，H-26)，1.68(3H，s，H-29)，3.19(1H，dd，J=16.2，5.3 Hz，H-3)，4.69(H，d，J=2.4 Hz，H-30a) ，4.56(1H，dd，J=3.6，1.2 Hz，H-30b)；13C-NMR(CDCl3，125 MHz) δ：38.7(C-1)，27.4(C-2)，79.0(C-3)，38.9(C-4)，55.3(C-5)，18.3(C-6)，34.3(C-7)，40.9(C-8)，50.5(C-9)，37.2(C-10)，21.0(C-11)，25.2(C-12)，38.1(C-13)，42.9(C-14)，27.5(C-15)，35.6(C-16)，43.0(C-17)，48.3(C-18)，48.0(C-19)，151.0(C-20)，29.9(C-21)，40.0(C-22)，28.0(C-23)，15.4(C-24)，16.1(C-25)，16.0(C-26)，14.6(C-27)，18.0(C-28)，109.3(C-29)，19.3(C-30)。以上数据与文献[12]报道羽扇豆醇的数据基本一致。, http://www.100md.com(刘潇潇 王磊 隆颖 孙丽丽 王强)
[基金项目] 国家自然科学基金青年科学基金项目(81302654)
[通信作者] *王强，教授，E-mail：qwang49@sohu.com
[作者简介] 刘潇潇，副主任药师，Tel：(020)81886161，E-mail：cpulxx@126.com
[摘要] 采用硅胶柱色谱，Sephadex LH-20和ODS等色谱技术对毛重楼根茎进行化学成分研究，得到12个化合物。通过理化数据和波谱分析鉴定其结构分别为羽扇豆醇(1)，羽扇豆醇二十八烷酸酯(2)，棕榈酸(3)，α-棕搁酸单甘油酯(4)，α-菠甾醇(5)，薯蓣皂苷元(6)，(25R)diosgenin-3-O-α-L-rhamnopyranosyl(1→4)-α-L-rhamnopyranosyl(1→4)-[α-L-rhamnopyranosyl(1→2)]-β-D-glucopyranoside(7)，偏诺皂苷元(8)，(25R)pennogenin-3-O-β-D-glucopyranosyl(1→3)-[α-L-rhamnopyranosyl(1→2)]-β-D-glucopyranoside(9)，flazin(10)，calonysterone(11)，异鼠李素-3-O-β-龙胆二糖苷(12)。其中化合物1～5，10～11为首次从该属植物中分离得到，所有化合物为首次从该植物中分离得到。
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[关键词] 毛重楼；重楼属；化学成分
毛重楼为延龄草科重楼属植物毛重楼Paris mairei Lévl的干燥根茎，主要分布在云南、四川和贵州，生长于海拔1 800～3 500 m的常绿阔叶林、松林、黄栎林等[1]。重楼属植物(Paris)极具药用价值，药理研究表明其具有止血、抗肿瘤、抗生育、免疫调节及治疗心血管疾病等作用，临床上用于治疗功能性子宫出血、神经性皮炎、外科炎症以及肿瘤等[2-6]。甾体皂苷是重楼属药用植物的主要活性成分，约占已分离鉴定总化合物的70%以上[5-6]。《中国药典》2010年版[7]收载滇重楼P. polyphylla Smith var. yunnanensis和华重楼P. polyphylla Smith var. chinensis作为药用，由于对这2种重楼的过度开发，其野生资源日益萎缩[8-9]。为了缓解重楼资源匮乏与药用需求日益增加的矛盾，寻找合适的重楼替代基源植物，扩大重楼属植物药用资源，对其相近属种植物毛重楼进行了化学成分研究。在前期工作基础上[10-11]，继续从毛重楼根茎的乙醇提取物中分离鉴定了12个化合物，其中化合物1～5，10～11为首次从该属植物中分离得到，所有化合物为首次从该植物中分离得到，为合理利用重楼属植物资源提供科学依据。
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1 材料
X4型双目镜显微熔点测定仪(北京泰克仪器有限责任公司)；BRUKER AV 500型核磁共振仪(TMS为内标)；Agilent 1100 MSD Trap质谱仪；岛津MS7070E型质谱仪；Perkin Elmer 241Me旋光测定仪；大孔树脂HPD-100为河北沧州宝恩化工有限公司产品；Sephadex LH-20为Pharmacia公司产品；反相ODS填料(40～60 μm)为 Fuji公司产品；柱色谱分离硅胶和薄层色谱硅胶均为青岛海洋化工厂产品；所用试剂均为分析纯。
毛重楼P. mairei干燥根茎于2005年采自云南省，由中国药科大学王强教授鉴定，凭证标本(MAL020)存放于中国药科大学生药学教研室。
2 提取与分离
干燥毛重楼根茎15 kg，粉碎后用5倍量80%乙醇加热回流提取3次，每次4 h，合并提取液，减压浓缩，提取物用水混悬，依次用石油醚、氯仿、水饱和正丁醇萃取，分别得到石油醚提取物(23 g)、氯仿提取物(240 g)、正丁醇提取物(410 g)。
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石油醚提取物(23 g)经硅胶柱色谱分离，石油醚-乙酸乙酯(100∶0，9∶1，8∶2，7∶3，6∶4)梯度洗脱，分离纯化得到化合物2(10 mg)，3(45 mg)。氯仿提取物(240 g)经硅胶柱色谱分离，氯仿-甲醇(100∶0，95∶5，9∶1，8∶2，7∶3)梯度洗脱，得到流分PML1～PML5。流分PML2(44 g)经硅胶柱色谱分离，石油醚-丙酮(100∶0，95∶5，9∶1，8∶2，7∶3，6∶4)梯度洗脱，分离纯化得到化合物1(12 mg)，4(23 mg)，5(120 mg)，6(18 mg)，8(22 mg)。流分PML3(120 g)经硅胶柱色谱分离，氯仿-甲醇-水(100∶0∶0，95∶5∶0.2，90∶10∶0.5，80∶20∶1，70∶30∶2，60∶40∶3)梯度洗脱，得到流分PML301～PML306，PML303经反向ODS柱色谱分离，丙酮-水(100∶30，100∶50，100∶70)梯度洗脱，得到化合物7(35 mg)，9(15 mg)。正丁醇提取物(410 g)用水溶解，经大孔树脂HPD-100柱色谱分离，用水-乙醇(100∶0，8∶2，6∶4，4∶6，2∶8)梯度洗脱，得到流分PMZ1-PMZ5，流分PMZ3(130 g)经硅胶柱色谱分离，氯仿-甲醇-水(100∶0∶0，95∶5∶0.2，90∶10∶0.5，80∶20∶1，70∶30∶2，60∶40∶3)梯度洗脱，经Sephadex LH-20(氯仿-甲醇1∶1)纯化，得到化合物10(16 mg)，11(11 mg)，12(21 mg)。
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3 结构鉴定
化合物1 无色针晶(甲醇-氯仿)；mp 215～216 ℃；ESI-MS m/z 425[M-H]-；/1H-NMR(CDCl3，500 MHz) δ：0.76(3H，s，H-24)，0.79(3H，s，H-28)，0.83(3H，s，H-25)，0.94(3H，s，H-27)，0.97(3H，s，H-23)，1.03(3H，s，H-26)，1.68(3H，s，H-29)，3.19(1H，dd，J=16.2，5.3 Hz，H-3)，4.69(H，d，J=2.4 Hz，H-30a) ，4.56(1H，dd，J=3.6，1.2 Hz，H-30b)；13C-NMR(CDCl3，125 MHz) δ：38.7(C-1)，27.4(C-2)，79.0(C-3)，38.9(C-4)，55.3(C-5)，18.3(C-6)，34.3(C-7)，40.9(C-8)，50.5(C-9)，37.2(C-10)，21.0(C-11)，25.2(C-12)，38.1(C-13)，42.9(C-14)，27.5(C-15)，35.6(C-16)，43.0(C-17)，48.3(C-18)，48.0(C-19)，151.0(C-20)，29.9(C-21)，40.0(C-22)，28.0(C-23)，15.4(C-24)，16.1(C-25)，16.0(C-26)，14.6(C-27)，18.0(C-28)，109.3(C-29)，19.3(C-30)。以上数据与文献[12]报道羽扇豆醇的数据基本一致。, http://www.100md.com(刘潇潇 王磊 隆颖 孙丽丽 王强)